熒光假單胞菌CP1108的發(fā)光酶基因(luxAB)標(biāo)記及其應(yīng)用.pdf

1、Pseudomonassp.CP1108為分離自棉花根圈的解磷假單胞菌，經(jīng)過16S rDNA序列比對，鑒定為熒光假單胞。通過三親本雜交的方法將標(biāo)記基因luxAB接合轉(zhuǎn)移進(jìn)CP1108菌株，所得的標(biāo)記菌株CP1108L具有發(fā)光活性和對Str、Tet和Km三種抗生素的抗性，轉(zhuǎn)移頻率為(4.65±0.01)×10 5。將標(biāo)記菌株經(jīng)連續(xù)進(jìn)行20 次傳代，均可檢測到發(fā)光現(xiàn)象。采用堿裂解法從CP1108L中提取質(zhì)粒，證明pTR102質(zhì)粒已成功地轉(zhuǎn)移

2、到CP1108菌株中，并且發(fā)現(xiàn)CP1108L菌株的部分生理生化特性、生長曲線和在土壤中的存活能力并沒有受到luxAB基因?qū)氲挠绊憽?br>　　 研究標(biāo)記菌株在土壤中的存活情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在0~42d內(nèi)，標(biāo)記菌株在滅菌土壤和不滅菌土壤中均能存活，總體呈現(xiàn)下降趨勢，在滅菌土壤中的定殖水平稍高于不滅菌土壤，第42d時，標(biāo)記菌株的定殖密度約為103~104cfu·g 1 土。將標(biāo)記菌株CP1108L接種到棉花根盒的微宇宙土壤中，研究其定殖情

3、況，發(fā)現(xiàn)標(biāo)記菌株在棉花根表的定殖密度高于根際土壤中的定殖密度，主要定殖在0~6cm 根段，且隨著深度的增加定殖密度降低；棉花生長14d時，CP1108L在棉花根圈達(dá)到了最高定殖水平，根圈的的定殖數(shù)量為2.31×10 5cfu·g1 根土、3.18×10 5cfu·g 1 鮮根，而其中以0~2cm根段處標(biāo)記菌株的定殖數(shù)量最大，根際和根表分別達(dá)到了9.08×10 4cfu·g 1 根土、1.44×10 5cfu·g 1 鮮根。
　　

4、 把棉花幼苗根部浸于細(xì)菌菌液中，研究了細(xì)菌在棉花幼根根表的吸附情況。發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定吸附發(fā)生在細(xì)菌與棉花幼根接觸的前8min，在前60min 內(nèi)，細(xì)菌的吸附量隨吸附時間的延長而增大，并且逐漸趨于飽和，解磷菌的最大吸附量為(1.02~1.48)×10 8cell·g 1 鮮根；從細(xì)菌的吸附動態(tài)曲線可以看出，其吸附規(guī)律符合Langmuir吸附等溫線。經(jīng)計算，E.coliDH5α、CP1108和CP1108L在棉花根表的最大吸附量q0分別為4.05×

5、10 6cell·g 1、1.45×10 8cell·g 1和1.19×10 8cell·g 1。解磷細(xì)菌的最大吸附量(10 8cell·g 1)約是大腸桿菌的最大吸附量(10 6cell·g 1)的100倍，說明解磷促生菌株對棉花幼根具有較高的親和性。因此，可將解磷菌株制成微生物接種劑應(yīng)用于棉花的盆栽試驗研究。
　　 對棉花進(jìn)行盆栽試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)接種CP1108和CP1108L菌液處理棉花植株的干重、主根長和株高顯著高于對照組