野生茄子托魯巴姆黃萎病抗性相關基因StoVel功能鑒定.pdf

1、黃萎病是一種危害性很大的植物維管束病害，嚴重影響著番茄、茄子、棉花、馬鈴薯等重要農作物的產(chǎn)量和品質。選育抗黃萎病的新品種，是控制植物黃萎病危害的最好途徑。可是，在現(xiàn)有的栽培品種中，抗病基因嚴重缺乏，從野生茄子Solanum torvum中克隆黃萎病抗性相關基因，并轉化植物，對植物黃萎病抗病育種具有重要意義。
　　 根據(jù)本實驗室克隆的抗黃萎病相關基因StoVel的cDNA序列，設計引物，獲得全長，構建表達載體pCAMBIA1304

2、-StoVel，通過農桿菌介導的遺傳轉化方法將StoVe1基因轉化到馬鈴薯和煙草基因組中。
　　 主要研究結果如下：
　　 馬鈴薯Désirée遺傳轉化。以莖段為外植體，獲得了25個潮霉素抗性株系，PCR檢測，有12株為陽性，其中10株表現(xiàn)為GUS染色陽性?；虮磉_分析表明，轉基因株系C9、C17和C24中StoVe1基因表達量高于野生型對照，是其5～9倍。提取馬鈴薯植株粗蛋白進行體外抑菌實驗，轉基因株系C9、C17和C

3、24蛋白提取物均明顯抑制Verticillium dahliae的生長。對這三個轉基因馬鈴薯株系進行V.dahliae侵染實驗，結果顯示，與對照相比，三個轉基因馬鈴薯株系表現(xiàn)出不同程度的抗性，其病情指數(shù)和發(fā)病率均低于對照。
　　 煙草NC89遺傳轉化。以葉片為外殖體，共得到了12個煙草抗性株系，7株表現(xiàn)為PCR陽性，選取三株轉基因煙草T14、T11和T7，qRT-PCR分析顯示，轉基因株系StoVe1基因表達量均比對照高，為對照

4、的2-6倍，提取葉片總蛋白粗提液，進行體外抑菌試驗，結果表明，轉基因煙草具有顯著的抑菌效果。
　　 為了研究茄科種屬間Ve1基因的同源關系，從野生茄子托魯巴姆中克隆了StoVe1基因DNA序列及蘇崎茄，馬鈴薯和煙草中Ve1基因DNA中間片段序列。SMART軟件在線分析顯示，Stovel具有15個亮氨酸重復序列(LRR)，富含LRR是抗病相關蛋白的特征之一。托魯巴姆、馬鈴薯和煙草中間片段都含5個LRR，而蘇崎茄含4個。通過NCBI