表達PPV2 ORF2和GoCV cap的重組腺病毒構(gòu)建.pdf

1、豬細小病毒2型(Porcine parvovirus type2，PPV2)是近年來新發(fā)現(xiàn)的細小病毒科成員，與傳統(tǒng)豬細小病毒的親緣性很遠，除在緬甸和中國浙江檢測及序列分析了4株病毒外，尚未見其他地區(qū)有檢測報告。鵝圓環(huán)病毒(Goose Circovirus，GoCV)也是近年來發(fā)現(xiàn)的圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬成員，能引起鵝免疫抑制，從而繼發(fā)感染其他病原。為檢測和控制PPV2和GoCV，本研究選取編碼結(jié)構(gòu)蛋白的PPV2 ORF2和GoCV cap

2、基因片段，應(yīng)用重組腺病毒系統(tǒng)進行了表達。
　　 將PPV2 ORF2和GoCV cap基因首先插入到穿梭載體pShuttle-CMV中獲得重組穿梭質(zhì)粒pShuttle-PPV2-ORF2和pShuttle-GoCV-Cap；PmeⅠ酶切線性化的重組穿梭質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化至含有腺病毒骨架載體pAdEasy-1的大腸桿菌BJ5183感受態(tài)中進行同源重組，經(jīng)卡那抗性篩選和酶切鑒定，獲得重組腺病毒質(zhì)粒pAd-PPV2-ORF2和pad-GoCV

3、-Cap；最后將PacⅠ酶切線性化的重組腺病毒質(zhì)粒與脂質(zhì)體Lipofectamine TM2000混合，轉(zhuǎn)染HEK-293細胞獲得重組腺病毒；經(jīng)蝕斑純化和鑒定，將重組腺病毒命名為rAd-PPV2-ORF2和rAd-GoCV-Cap。
　　 應(yīng)用間接免疫熒光方法檢測到PPV2 ORF2和GoCV cap基因在重組腺病毒感染的HEK-293細胞中表達，并證實重組腺病毒系統(tǒng)表達的PPV2 ORF2和GoCV cap基因產(chǎn)物具有良好的免