豬IFN-α融合PPV VP2-PCV2 ORF2基因真核表達載體構建及免疫原性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、干擾素(interfron， IFN)是病毒或干擾素誘生劑(Interferon inducer)進入動物機體后誘導宿主細胞產生的微量并具有廣譜抗病毒和免疫調節(jié)等多種生物活性的一類細胞因子。豬α干擾素(PoIFN-α)可被用于免疫增強劑和豬病毒病的治療。為探索PoIFN-α作為分子佐劑對核酸疫苗的免疫增強作用，本研究應用PCR技術從太湖豬肝臟基因組中擴增得到太湖豬IFN-α基因CDS區(qū)全序列，對其進行序列測定，然后將太湖豬IFN-α插入

2、到pCI-VP2-ORF2質粒中，構建了融合表達載體PCI-IFN-α-ORF2-VP2。將該質粒轉染PK15細胞后運用間接免疫熒光對PCV2的ORF2蛋白和PPVVP2蛋白進行檢測。并以BALA/c小鼠為動物模型，分別運用pCI-IFN-a-ORF2-VP2、pCI-VP2-ORF2、pCI空載體、豬細小病毒滅活疫苗、豬圓環(huán)病毒亞單位疫苗通過肌注進行免疫，并于14天進行加強免疫。免疫后采集小鼠脾臟、外周血，運用MTT比色法、流式細胞術

3、和ELISA法檢測了免疫小鼠脾臟淋巴細胞的轉化功能、外周血中CD4+和CD8+淋巴細胞比例以及PCV2和PPV抗體效價。
　　 結果顯示：太湖豬IFN-α基因在編碼區(qū)具有三處突變，其中兩處錯義突變導致了編碼氨基酸的改變。重組質pCI-IFN-a-ORF2-VP2轉染PK后48小時運用間接免疫熒光可以檢測到PCV2ORF2和PPVVP2蛋白的表達。運用該質粒免疫小鼠后能誘導小鼠產生良好的免疫應答，且重組質粒pCI-IFN-α-OR

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