山東省豬瘟病毒流行株E2基因多態(tài)性分析和E2基因真核表達載體的構(gòu)建及免疫原性鑒定.pdf

1、豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性傳染病，以高稽留熱、皮膚和黏膜廣泛出血為臨床特征，死亡率極高。豬瘟的流行給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，嚴重影響了生豬及相關(guān)產(chǎn)品的進出口貿(mào)易。我國是世界上豬瘟的主要流行地區(qū)之一，以隱性感染和散發(fā)流行為主要特點，流行情況復(fù)雜。開展系統(tǒng)的豬瘟病毒流行病學(xué)調(diào)查，掌握豬瘟流行毒株變化規(guī)律和變異程度，研制新型豬瘟疫苗，對我國豬瘟防控工作有著極其重要的意義。具體研究內(nèi)容和結(jié)果分為以下三部分:
　　1.山東

2、省豬瘟病毒流行毒株的分離和鑒定
　　本研究以2011年至2012年在山東省規(guī)?；i場采集的656份樣品為研究對象，通過RT-PCR技術(shù)檢測樣品中是否含有豬瘟病毒，結(jié)果136份樣品中檢出豬瘟病毒，陽性率為20.66％。該結(jié)果說明山東省內(nèi)規(guī)?；i場普遍存在豬瘟病毒感染。將檢出的陽性樣品接種PK-15細胞，分離病毒，并通過RT-PCR和real-time PCR進行鑒定。
　　2.山東省豬瘟流行毒株E2基因多態(tài)性研究
　　為

3、了進一步了解山東省內(nèi)豬瘟的流行特點，通過RT-PCR手段獲得分離毒株的E2基因序列，然后將序列與參考毒株的E2基因序列進行比對，分析流行毒株的基因多樣性。結(jié)果共分離獲得9株2.1亞型豬瘟病毒毒株且彼此的同源性極高，而分離毒株與疫苗株的核苷酸同源性和氨基酸同源性分別為79.5-81.6％和81.2-85.9％。這些數(shù)據(jù)表明山東省豬瘟流行毒株與疫苗毒株已有較大差異，并且繼續(xù)在向遠離疫苗株的方向進化。
　　3.豬瘟病毒E2基因真核表達裁

4、體的構(gòu)建及免疫原性鑒定
　　為了研究E2基因變化對其表達產(chǎn)物的免疫原性影響，我們將不同長度E2基因片段插入真核表達載體pVAX-1中，構(gòu)建了一系列重組真核表達載體并分別命名為pVAX-999rE2、pVAX-900rE2、pVAX-540rE2，首先通過RT-PCR檢測和間接免疫熒光試驗，驗證重組真核載體能否在PK-15細胞內(nèi)表達，然后免疫小鼠，通過ELISA試驗和淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗來評估重組真核載體的免疫原性。研究結(jié)果為:經(jīng)RT-