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文檔簡介
1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)可以引起包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)在內(nèi)的多種疾病。自從1991年在加拿大發(fā)現(xiàn)以來,在世界各地都陸續(xù)報(bào)道本病。目前,雖然商品化PCV2疫苗已經(jīng)問世并廣泛使用,但我國PCV2感染率仍呈逐年上升趨勢,并已成為危害我國養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要免疫抑制性疫病之一,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。主要原因是目前應(yīng)用的疫苗大多是針對PCV2a型病毒,而目前豬群中主要以PCV2b感染居多,而傳統(tǒng)疫苗由于PCV2具有在細(xì)胞上繁殖
2、條件特殊,沒有明顯細(xì)胞病變以及繁殖病毒滴度低等缺點(diǎn),使PCV2傳統(tǒng)疫苗生產(chǎn)周期長,成本高,并且免疫效果不理想。因此開發(fā)PCV2新型疫苗已成為疫苗研制的主要研究方向。由于核酸疫苗具有免疫原性好,可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞和體液免疫,沒有潛在的致病危險(xiǎn)和毒力返祖現(xiàn)象,制備工藝簡單,生產(chǎn)成本低,便于運(yùn)輸和貯存等優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)成為新型疫苗研究的熱點(diǎn)。有報(bào)道在公豬的精液中檢測出PCV2,PCV2可以通過人工受精的方式廣泛傳播,使得PCV2的預(yù)防更加困難。<
3、br> 本研究針對PCV2b型病毒構(gòu)建核酸疫苗,將其ORF2基因克隆到真核表達(dá)載體pVAX1中,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-PCV2-ORF2。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞中,用制備的特異性PCV2多克隆抗體檢測到ORF2基因可以在細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá),為后期的動物免疫實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。用雄性小鼠作為動物模型,隨機(jī)分成5組,分別免疫滅菌PBS(PBS組)、空載體pVAX1(空載體組)、真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1-pIL-15(佐劑組)、真核表
4、達(dá)質(zhì)粒pVAX1-PCV2-ORF2(單獨(dú)免疫組)和聯(lián)合免疫pVAX1-PCV2-ORF2和pVAX1-pIL-15(聯(lián)合免疫組)。在免疫過程中利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)和中和抗體實(shí)驗(yàn),檢測疫苗對小鼠體液免疫應(yīng)答的影響;利用淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù)和雙抗體一步夾心ELISA法,檢測疫苗對小鼠細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響;利用PCV2攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn),檢測疫苗對小鼠的保護(hù)效果,分別從體重變化,小鼠體內(nèi)PCV2含量,各組織病理變化以及對生殖器官的影響加以評
5、價(jià)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,單獨(dú)免疫組小鼠各項(xiàng)免疫指標(biāo)均高于PBS組和空載體組小鼠,聯(lián)合免疫組的免疫效果更顯著增強(qiáng)。此外,該核酸疫苗對PCV2攻擊具有一定的保護(hù)作用,而且也可以保護(hù)雄性動物的生殖系統(tǒng),聯(lián)合免疫后保護(hù)效果更加顯著。
綜上所述,pIL-15作為PCV2核酸疫苗的免疫分子佐劑,不但能增強(qiáng)機(jī)體體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答水平,還能提高小鼠抵抗PCV2感染的能力。本研究為開發(fā)安全有效的PCV2新型疫苗提供一定的理論依據(jù)和
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