PCV2 ORF2基因真核表達質(zhì)粒的構建及與豬IL-15聯(lián)合免疫效果研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)可以引起包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)在內(nèi)的多種疾病。自從1991年在加拿大發(fā)現(xiàn)以來，在世界各地都陸續(xù)報道本病。目前，雖然商品化PCV2疫苗已經(jīng)問世并廣泛使用，但我國PCV2感染率仍呈逐年上升趨勢，并已成為危害我國養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要免疫抑制性疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。主要原因是目前應用的疫苗大多是針對PCV2a型病毒，而目前豬群中主要以PCV2b感染居多，而傳統(tǒng)疫苗由于PCV2具有在細胞上繁殖

2、條件特殊，沒有明顯細胞病變以及繁殖病毒滴度低等缺點，使PCV2傳統(tǒng)疫苗生產(chǎn)周期長，成本高，并且免疫效果不理想。因此開發(fā)PCV2新型疫苗已成為疫苗研制的主要研究方向。由于核酸疫苗具有免疫原性好，可以誘導機體產(chǎn)生細胞和體液免疫，沒有潛在的致病危險和毒力返祖現(xiàn)象，制備工藝簡單，生產(chǎn)成本低，便于運輸和貯存等優(yōu)點，已經(jīng)成為新型疫苗研究的熱點。有報道在公豬的精液中檢測出PCV2，PCV2可以通過人工受精的方式廣泛傳播，使得PCV2的預防更加困難。<

3、br>　　 本研究針對PCV2b型病毒構建核酸疫苗，將其ORF2基因克隆到真核表達載體pVAX1中，構建真核表達質(zhì)粒pVAX1-PCV2-ORF2。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK-21細胞中，用制備的特異性PCV2多克隆抗體檢測到ORF2基因可以在細胞內(nèi)大量表達，為后期的動物免疫實驗奠定了基礎。用雄性小鼠作為動物模型，隨機分成5組，分別免疫滅菌PBS(PBS組)、空載體pVAX1（空載體組）、真核表達質(zhì)粒pVAX1-pIL-15（佐劑組）、真核表

4、達質(zhì)粒pVAX1-PCV2-ORF2(單獨免疫組)和聯(lián)合免疫pVAX1-PCV2-ORF2和pVAX1-pIL-15(聯(lián)合免疫組)。在免疫過程中利用酶聯(lián)免疫吸附實驗和中和抗體實驗，檢測疫苗對小鼠體液免疫應答的影響;利用淋巴細胞增殖實驗，流式細胞術和雙抗體一步夾心ELISA法，檢測疫苗對小鼠細胞免疫應答的影響;利用PCV2攻毒保護實驗，檢測疫苗對小鼠的保護效果，分別從體重變化，小鼠體內(nèi)PCV2含量，各組織病理變化以及對生殖器官的影響加以評

5、價。
　　 實驗結果表明，單獨免疫組小鼠各項免疫指標均高于PBS組和空載體組小鼠，聯(lián)合免疫組的免疫效果更顯著增強。此外，該核酸疫苗對PCV2攻擊具有一定的保護作用，而且也可以保護雄性動物的生殖系統(tǒng)，聯(lián)合免疫后保護效果更加顯著。
　　 綜上所述，pIL-15作為PCV2核酸疫苗的免疫分子佐劑，不但能增強機體體液和細胞免疫應答水平，還能提高小鼠抵抗PCV2感染的能力。本研究為開發(fā)安全有效的PCV2新型疫苗提供一定的理論依據(jù)和