

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、為了研究病毒編碼蛋白的結構與功能的關系,并為山東省PRRS及PCV的防治提供一種理論和實際依據,本研究對PRRSV SD1株的ORF5和PCV SD2株的ORF2進行了測序,根據哺乳動物細胞真核表達載體pIRES MCSA MCSB多克隆位點的序列和PRRSV SD1株ORF5和PCV SD2株的ORF2基因閱讀框架,同時考慮外源基因的表達量在基因起始密碼子的前面加入Kozak序列,分別設計了針對ORF5、ORF2的引物Y1/Y2,H1
2、/H2。將PCR產物ORF2經雙酶切回收后插入真核表達載體pIRES得到pIRES-ORF2,RT-PCR產物ORF5經雙酶切回收后插入pIRES-ORF2構建成重組質粒pIRES-ORF2/ORF5。經PCR、RT-PCR、雙酶切及測序鑒定,證明成功構建了轉移載體pIRES-ORF2/ORF5。 將構建成功的pIRES-ORF20RF5重組質粒用脂質體法轉染真核細胞Marc-145,經G418加壓篩選獲得穩(wěn)定表達的細胞株,以P
3、CR、RT-PCR、和間接免疫熒光檢測目的蛋白的表達情況。結果表明:經PCR、RT-PCR檢測到兩種目的基因的轉錄;間接免疫熒光試驗檢測到目的蛋白在細胞漿和細胞核中觀察到了特異性的亮綠色熒光,證明蛋白得到表達。 首次在國內將PRRSV ORF5與PCV2 ORF2同時插入哺乳動物細胞真核表達載體并進行成功表達,為構建PRRSV與PCV雙基因真核表達載體的研究提供思路和依據。 從2006年6月份開始,我國南方暴發(fā)了嚴重的豬
4、”高熱病”,目前已造成上千萬頭豬只的死亡,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大損失。山東省于2006年12月份開始暴發(fā)此病。通過細胞中傳代培養(yǎng),分離出2株變異毒株,通過RT-PCR技術從中擴增出PRRSV ORF5片段,并測其序列。應用DNASTAR、DNAMAN序列分析軟件對所測的2株序列與北美洲原型(VR-2332株)、歐洲原型(LV株)和部分國內外分離株的相應片段進行核苷酸同源性比較,差異較大,均為強毒株。從而為山東地區(qū)無名高熱PRRSV的控制及疫
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- PRRSV貴州株ORF5基因表達載體的構建及其變異的研究.pdf
- PRRSV病毒分離及其ORF5基因序列分析.pdf
- 山東PCV2全基因序列分析及含CpG的PCV2ORF2的真核表達載體的構建和表達.pdf
- PRRSV寧夏株的分離鑒定及其ORF5、Nsp2基因的克隆與序列分析.pdf
- 歐洲型PRRSV的分離與鑒定及其ORF5基因變異分析.pdf
- PCV2 SCH1-10株ORF2基因序列分析及PCV2 PCR檢測方法的建立.pdf
- PCV2感染的血清學調查及其陜西分離株ORF2基因的原核表達.pdf
- 含有CpG基序的PRRSV ORF5基因的真核重組表達載體的構建及其免疫反應的研究.pdf
- PCV2 ORF2基因真核表達質粒的構建及與豬IL-15聯合免疫效果研究.pdf
- PRRSV的RdRp、ORF3和ORF5基因的原核表達及間接ELISA方法的建立.pdf
- 豬IL-15與PRRSV ORF5基因真核表達質粒的構建及其免疫原性分析.pdf
- PCV-2山東株感染性克隆的構建及ORF2基因的原核表達.pdf
- PRRSV CH-1R株黏膜免疫效果的測定及其ORF5的遺傳變異分析.pdf
- 豬2型圓環(huán)病毒河南株ORF2基因的克隆、序列分析及其真核表達.pdf
- PCV2 ORF2基因在大腸桿菌中的表達及與PCV2滅活抗原免疫效果的比較.pdf
- PPV VP2基因與PCV2 ORF2不同抗原優(yōu)勢區(qū)重組真核表達質粒的構建及其免疫效果研究.pdf
- 5株PRRSV ORF3,5,6基因的變異分析及ORF3-5串聯基因重組腺病毒的構建.pdf
- PRRSV ORF5 與ORF6基因重組改良型痘苗病毒安卡拉株的免疫效力研究.pdf
- 規(guī)?;i場PRRSV與PCV2感染狀況及其變異分析.pdf
- 豬圓環(huán)病毒2型吉林株的分離與鑒定及ORF2基因序列分析.pdf
評論
0/150
提交評論