PCV2的分離鑒定及與PRRSV混合感染仔豬的血液病理學(xué)研究.pdf

1、豬Ⅱ型圓環(huán)病毒(PCV2)是近幾年豬群中最重要的病原之一，在豬群中的感染率越來越高。本研究通過雙抗體夾心ELISA方法和PCR方法對來自山東泰安的發(fā)病豬組織病料進(jìn)行PCV2檢測。將檢測為陽性的病料懸液接種無PCV1污染的PK-15細(xì)胞進(jìn)行病毒分離，獲得一株P(guān)CV2，命名為豬Ⅱ型圓環(huán)病毒山東泰安株(PCV2sdt)。間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)檢測可見病毒接種細(xì)胞中散在特異性熒光。提取培養(yǎng)病毒細(xì)胞全基因組DNA為摸板，進(jìn)行病毒基因組1號開放

2、式閱讀框(ORF1)、2號開放式閱讀框(ORF2)和全基因組序列擴(kuò)增，得到長度分別為945bp、702bp和1767bp左右的產(chǎn)物條帶。將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pMD18-T載體上，構(gòu)建重組質(zhì)粒pMD18-T-ORF1、pMDl8-T-ORF2和pMD18-T-PCV2。重組質(zhì)粒測序結(jié)果顯示，所分離病毒的ORF1、ORF2和全基因組序列長度分別為945bp、702bp和1767bp。DNAStar生物學(xué)軟件分析發(fā)現(xiàn)，PCV2分離毒株與No.DQ

3、218420等各參考株的全基因組同源性介于95.4％～98.8％之間，ORF1的同源性介于97.0％～98.8％，ORF2的同源性略低，介于91.9％～98.4％之間。 選取40日齡左右早期斷奶仔豬人工接種PRRSV和PCV2+PRRSV，借助儀器動態(tài)檢測外周血生理指標(biāo)、生化指標(biāo)和淋巴細(xì)胞凋亡比率。結(jié)果表明，病毒感染對外周血各種指標(biāo)都有一定的影響，WBC、GPT、GOT、LDH、GLO及TBIL感染組高于對照組；RBC、HGB、