PRRSV安徽株的分離鑒定及感染仔豬病理學(xué)的研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種傳染病，該病的主要特征是引起母豬繁殖障礙、仔豬和育肥豬呼吸系統(tǒng)疾病，并有較高的死亡率。1987年，該病在美國(guó)首次暴發(fā)，2006年夏秋季開(kāi)始在我國(guó)大部分地區(qū)爆發(fā)流行，給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)極大的經(jīng)濟(jì)損失。為了研究PRRSV流行毒株的來(lái)源和變異原因，探索相關(guān)的防控措施，本研究

2、對(duì)2008年從安徽地區(qū)兩個(gè)發(fā)病豬場(chǎng)采集疑似豬繁殖與呼吸綜合征病料，進(jìn)行PRRSV流行毒株的分離鑒定，并對(duì)其N(xiāo)sp2、ORF7基因進(jìn)行克隆與序列分析；同時(shí)用分離毒株接種健康仔豬，進(jìn)行病理組織學(xué)的觀察，并采用間接免疫組化法，分析PRRSV抗原的在感染仔豬體內(nèi)和分布情況，為安徽省PRRSV流行株的來(lái)源、分子流行病學(xué)和變異情況等提供科學(xué)依據(jù)，為進(jìn)一步研究病毒在動(dòng)物體內(nèi)的持續(xù)感染狀況和闡明PRRSV的致病機(jī)奠定理論基礎(chǔ)。
　　 2008年

3、從安徽地區(qū)兩個(gè)發(fā)病豬場(chǎng)采集疑似豬繁殖與呼吸綜合征病料，在Marc-145細(xì)胞上盲傳4～5代，發(fā)現(xiàn)有明顯細(xì)胞病變。用PRRSV(Nsp21594～1680變異株)RT-PCR檢測(cè)試劑盒可擴(kuò)增出目的片斷；用間接免疫熒光試驗(yàn)可觀察到特異性熒光；通過(guò)電鏡觀察可見(jiàn)直徑50～80 nm的有囊膜的病毒粒子。證實(shí)分離到兩株豬繁殖與呼吸綜合征病毒，命名為HS08株和ZJ08株。
　　 用RT-PCR擴(kuò)增兩個(gè)分離毒株HS08株和ZJ08株的Nsp2

4、和ORF7基因，進(jìn)行克隆和序列分析。結(jié)果表明這兩個(gè)分離毒株核苷酸同源性＞99.0％；在Nsp2基因上，這兩個(gè)分離毒株均發(fā)生30個(gè)氨基酸的不連續(xù)缺失，它們與CH-1a株之間核苷酸同源性分別為80.7％和80.2％；在ORF7基因上，它們與2007年國(guó)內(nèi)高致病性藍(lán)耳病毒株HuN核苷酸同源性較高，達(dá)到98.4％和99.5％，且ORF7基因均存在K46→R46，H109→Q109，V117→A117氨基酸突變。這些信息顯示這兩個(gè)安徽分離株屬美洲

5、型毒株，具有高致病性特征，與國(guó)內(nèi)高致病性毒株位于同一基因群。
　　 將6頭60日齡的PRRSV抗原與抗體均為陰性健康仔豬隨機(jī)分為3組，每組各兩頭。A、B兩組經(jīng)鼻腔接種分離株HS08株和ZJ08株的第12代細(xì)胞培養(yǎng)物2 mL/頭，C組為對(duì)照組。試驗(yàn)組的仔豬在攻毒后第一天，體溫就升高到41℃，并持續(xù)高熱，最高時(shí)可達(dá)42.3℃，攻毒后第6天，就可以檢測(cè)到PRRSV抗體，第10天抗體水平達(dá)到最高。通過(guò)對(duì)臨床癥狀、剖檢病變、病理切片的觀察