一株地方株PRRSV分離鑒定及GP5基因疫苗研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是一種以引起各種年齡豬呼吸道疾病和母豬繁殖障礙為特征的傳染病，其病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)，是危害養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一。目前，世界上流行的PRRSV基因型主要有以LV株為代表的歐洲型和以VR2332株為代表的美洲型。自1996年，PRRSV在我國被分離得以來，在我國流行呈蔓延趨勢。2006年我國部分地

2、區(qū)還暴發(fā)了高致病性豬藍耳病，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失。
　　 試驗分為兩部分：
　　 1.PRRSV-SDDP株的分離鑒定及全基因組序列分析
　　 2009年在實驗室臨床病例診斷過程中分離得到一株豬繁殖與呼吸綜合癥病毒(SDDP株)，參考美洲型代表株(VR-2332)及近幾年國內分離得到的毒株設計了13對引物對其全基因組進行了克隆測序、系統(tǒng)進化樹分析。結果顯示，SDDP-PRRSV株屬美洲型PRRSV，與

3、高致病性PRRSV代表株SX-1、JX143、JXA1的同源性在98.7-99.7％，非結構基因NSP2的變異性最大，與美洲代表VR2332存在90個核苷酸的缺失(位于NSP2核酸序列的1540-1542、1594-1680)，這與2006年來分離得到的毒株相似。結構基因ORF6、7的相對保守。SDDP分離株與國內其他分離株相比呈現(xiàn)出一定的新特性，為高致病性藍耳病的防治提供理論依據(jù)。
　　 2.不同分子佐劑對PRRSV-GP5核

4、酸疫苗免疫效果影響的研究
　　 基因疫苗主要是由真核表達載體和保護性抗原基因構成的，與傳統(tǒng)疫苗相比較，具有設計靈活、安全性高、性質穩(wěn)定、成本低、同時誘導體液免疫和細胞免疫等優(yōu)點。然而核酸疫苗同時存在抗體產生慢且水平低的問題，需要加入有效的佐劑才能克服這些缺點，國內外學者一直在探索進一步提高基因免疫效果的方法，其中在基因免疫表達載體中引入調節(jié)分子是其中重要的措施之一。
　　 試驗中選取補體C3d、干擾素誘導蛋白10(IP-

5、10)，法氏囊三肽(BS)，胸腺五肽(TP)作為分子佐劑與PRRSV的保護性抗原GP5構建到表達載體pcDNA3.1中，大量提取重組質粒，轉染293T細胞，經間接免疫熒光證明重組質粒能在細胞內表達。重組質粒免疫小鼠，通過ELISA試劑盒檢測小鼠體內抗體、IL-4和IFN-γ的水平，結果顯示，抗體效價、IL-4和IFN-γ含量均比對照組高，在分子佐劑組中以pcDNA3.1-IP-10-GP5組的效果最好，與空白對照及PCDNA3.1-GP