齊口裂腹魚潰瘍病病原分離鑒定及病理學(xué)觀察.pdf

1、齊口裂腹魚是長江上游特有的亞冷水性名貴經(jīng)濟魚類，市場價值和開發(fā)潛力較大。2005年12月至2006年4月，雅安、攀枝花等地多個齊口裂腹魚網(wǎng)箱養(yǎng)殖場的齊口裂腹魚魚種先后出現(xiàn)一以背鰭一側(cè)皮膚破裂、肌肉潰爛現(xiàn)象為特征的疾病，給養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了很大的經(jīng)濟損失。通過細菌學(xué)常規(guī)分離鑒定方法和分子生物學(xué)方法對致病菌進行鑒定，找出了引起該病的病原；同時研究了該病原的特性和發(fā)病魚的病理學(xué)變化，并進行了相關(guān)的藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)該細菌對氯霉素、頭孢克諾等抗生素敏感

2、；戊二醛和新潔爾滅聯(lián)用能夠顯著提高對該菌外殺滅效果。 從自然發(fā)病的齊口裂腹魚中分離到一株病原菌D060501。該菌株在 TSA 平板上生長呈邊緣光滑、有光澤的圓形白色菌落，在兔血平板上培養(yǎng)24h形成透明的β溶血環(huán)。顯微鏡下為革蘭氏陰性短桿菌。該菌具運動性，能發(fā)酵葡萄糖；脂酶、氧化酶和精氨酸雙水解酶反應(yīng)陽性；能利用葡萄糖產(chǎn)氣，阿拉伯糖產(chǎn)酸；麥芽糖、氰化鉀和 V-P 反應(yīng)陽性；硫化氫、DNA 酶和尿素反應(yīng)陰性。應(yīng)用細菌通用 PCR引

3、物，擴增出D060501菌株的16SRNA的互補DNA片段，該片段大小為1591bp。將獲得的序列在RDP數(shù)據(jù)庫進行在線 Classifer。結(jié)果表明，該菌屬于氣單胞菌屬的細菌，再將獲得的序列與GenBank中已報道的的7株嗜水氣單胞菌 16SrRNA 序列用DNAstar軟件進行多序列比對分析和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果證實，D060501分離株與其他嗜水氣單胞菌形成一個簇群，同源性高達99.1％以上。由D060501菌株的系統(tǒng)進化樹分析可

4、見，該菌與其他7株菌在進化上距離小于0.5，故確定該菌為嗜水氣單胞菌。 以D060501株通過肌肉注射、劃痕浸泡和浸泡試對齊口裂腹魚進行了人工感染，并研究了病理變化。結(jié)果表明，驗檢測該菌對齊口裂腹魚的毒力，前兩種方式出現(xiàn)與自然發(fā)病魚相似的體表潰瘍癥狀，并引起死亡；在無菌條件下，從人工感染發(fā)病的齊口裂腹魚病灶周圍肌肉和肝臟中分離到與D060501株形態(tài)與生化特性一致的相同的病原細菌，表明嗜水氣單胞菌D060501株是齊口裂腹魚皮膚

5、潰爛病的病原。鏡下可見病灶周邊骨骼肌水腫，間隙增寬，伴有大量炎性細胞浸潤，肌纖維斷裂溶解成空泡狀，嚴重的僅殘存少量的肌膜。組織切片可見腎小管上皮細胞腫脹，輕微的空泡變性；由于腎小管的擴張導(dǎo)致腎間質(zhì)區(qū)域被擠壓變小，部分區(qū)域間質(zhì)細胞成分明顯減少；腎小球毛細血管擴張充血；肝臟細胞水腫，嚴重空泡變性，大量肝細胞壞死；脾臟嚴重出血，淋巴細胞大量減少，且可見大量含鐵血黃素。對嗜水氣單胞菌D060501株的藥敏試驗表明，氯霉素、頭孢克諾、慶大霉素、紅