中國獼猴桃主產(chǎn)區(qū)潰瘍病病原菌鑒定及其致病力檢測.pdf

1、獼猴桃(Actinidia)原產(chǎn)于中國是一種非常珍貴的果樹資源，在中國廣大地區(qū)都有分布。由于獼猴桃適應性強，繁殖容易，對土壤的酸堿度等條件要求不嚴，一年種植多年受益，加之其經(jīng)濟價值較高、風味獨特、用途廣泛，特別是維生素C含量非常豐富，享有“果中之王”之美譽，因而被廣泛種植。近年來，由于獼猴桃種植面積迅速擴大，獼猴桃細菌性潰瘍病(Kiwifruit bacterial canker)傳播迅速，病害威脅日益增加，危害程度日趨嚴重。獼猴桃潰瘍

2、病是一種由丁香假單孢桿菌獼猴桃致病種(Pseudomonas syringae pv.actinidae)引起的毀滅性病害，此病先后在日本、美國、韓國及意大利等國相繼被發(fā)現(xiàn)。最近，在法國、葡萄牙、西班牙、瑞士、新西蘭及智利等也了有相關(guān)報道。在我國，首先在湖南、安徽、陜西、四川等地區(qū)發(fā)現(xiàn)了此病，現(xiàn)已擴展到獼猴桃多數(shù)主產(chǎn)區(qū)，造成的經(jīng)濟損失慘重。
　　 本試驗通過對中國不同區(qū)域獼猴桃潰瘍病發(fā)病植株的枝條、葉片進行采集、對潰瘍病病原菌進

3、行分離和培養(yǎng)純化，利用16S rDNA和16S-23S rDNA間隔區(qū)序列(ITS)對細菌近緣種(related species)、致病品種(pathogenic variety)和菌株(strain)的區(qū)分和相關(guān)分子技術(shù)進行克隆測序，確定該菌為獼猴桃潰瘍病病菌后，通過接種篩選相關(guān)獼猴桃抗病種質(zhì)資源，為新品種選育和抗性資源的利用提供理論依據(jù)。
　　 研究主要結(jié)果如下：
　　 l、根據(jù)我們從安徽省岳西縣、陜西省戶縣及重慶市

4、黔江等獼猴桃主產(chǎn)區(qū)的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，獼猴桃潰瘍病主要為害獼猴桃的主干、枝蔓和葉片。在枝干上病部初期有乳白色的菌膿大量溢出、后變成紅褐色的粘液附著在病斑表面，隨后病斑上部枝條萎蔫死亡。在葉片上則表現(xiàn)為中間病斑深褐色、邊緣有不規(guī)則的黃色近圓形病斑。
　　 2、從產(chǎn)區(qū)收集到的潰瘍病感染枝條和樹皮中共分離純化得到10株分離物：SXQM、SXHWD、A18、A17、C33、SXHY、AKA5、AKB5、AK14、AK18。所有分離物均可使煙草葉

5、片產(chǎn)生過敏反應，使獼猴桃品種健康葉片致病。獼猴桃葉片接種顯示同一菌株對不同品種及不同菌株對同一品種的致病力均存在差異。
　　 3、將分離得到的菌株用16S rDNA和16S-23S rDNA間隔區(qū)序列(ITS)進行分子鑒定。以分離物和意大利對照菌株的菌液做為模板，應用16S rDNA通用引物和特異引物PsaF1、PsaR2進行PCR擴增，均獲得片段長度約1500 bp和300 bp的目的條帶。將不同菌株P(guān)CR產(chǎn)物分別回收純化，經(jīng)

6、測序分析發(fā)現(xiàn)，10株致病菌的DNA片段大小一致，均為1448bp和280bp，且序列相同。由此可見，所分離純化的10株菌為同一致病菌。
　　 4、將16S rDNA的序列Blast比對、分析結(jié)果顯示，該序列與丁香假單孢桿菌獼猴桃致病變種已報道的菌株GQ914994、AB001439、EU906856及AJ889840序列一致。通過將16S-23S rDNA的序列Blast比對、分析結(jié)果顯示該序列也與丁香假單孢桿菌獼猴桃致病變種已

7、報道的菌株JN172920.1、HM032088.1、D86357.1及AY342165.1等的16S-23S rDNA ITS序列一致。
　　 5、構(gòu)建進化樹，將分離物與丁香假單孢桿菌獼猴桃致病變種相近的物種進行聚類，16SrDNA聚類結(jié)果發(fā)現(xiàn)GQ914994、AB001439、EU906856及AJ889840菌株的親緣關(guān)系最近，16S-23S rDNA結(jié)果發(fā)現(xiàn)JN172920.1、HM032088.1、D86357.1及A