安徽PRRSV的分離鑒定及藥物體外對(duì)PRRSV的作用研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起豬的一種傳染病，自從1987年首次在美國(guó)發(fā)現(xiàn)以后，迅速遍及世界各地。安徽地區(qū)從2006年至今在多個(gè)豬場(chǎng)出現(xiàn)了豬高致病性藍(lán)耳病，且死亡率較高，使安徽地區(qū)的養(yǎng)豬業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 1將采自安徽地區(qū)不同豬場(chǎng)的80份發(fā)病豬的肺臟、脾和淋巴結(jié)等組織病料進(jìn)行PRRSV的檢測(cè)，篩選陽(yáng)

2、性樣品經(jīng)處理后接種到Marc-145細(xì)胞上，分離到2株病毒。采用電鏡觀察，間接免疫熒光試驗(yàn)、RT-PCR檢測(cè)對(duì)這2株分離株進(jìn)行鑒定，并在Marc-145細(xì)胞上完成了病毒的增殖、TCID50的測(cè)定和理化性質(zhì)的鑒定，最后證實(shí)為PRRSV，命名為JZ08和HS08。
　　 2對(duì)2株P(guān)RRSV的分離毒株ORF5和ORF6基因進(jìn)行擴(kuò)增，并進(jìn)行基因序列分析和抗原位點(diǎn)預(yù)測(cè)等。結(jié)果表明，2株P(guān)RRSV的ORF5基因的核苷酸同源性為99.2％，O

3、RF6基因的核苷酸同源性為99.6％；其次2株P(guān)RRSV流行株與JAX1株同源性最高，在98.3％-99.3％之間；由ORF5、ORF6基因所建立的遺傳進(jìn)化樹(shù)可知，2株P(guān)RRSV流行株之間的遺傳距離最近，其次是JXA1，HUN4流行株，同屬美洲型；我國(guó)流行的PRRSV毒株分為2個(gè)組：以CH-1a為代表的包含JXA1，HUN4等高致病性變異毒株在內(nèi)的毒株為一個(gè)組；以VR-2332為代表的包含部分國(guó)內(nèi)分離毒株為另一組；對(duì)分離株的ORF5和O

4、RF6基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行分析，可以看出分離株的ORF5基因在多個(gè)核苷酸位點(diǎn)發(fā)生突變，而ORF6基因則相對(duì)保守。
　　 3選取黃芪多糖、利巴韋林、鹽酸嗎啉胍、金剛烷胺、豬基因干擾素為抗病毒藥物，與HS08株P(guān)RRSV進(jìn)行作用，采用MTT法與細(xì)胞病變(CPE)法，通過(guò)Marc-145細(xì)胞先感染病毒后加藥、先加藥后感染病毒、藥物和病毒直接作用三個(gè)環(huán)節(jié)，對(duì)藥物的作用效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制時(shí)，金剛烷胺、利巴韋林、鹽酸

5、嗎啉胍藥物組0D值極顯著大于病毒對(duì)照組（P＜0.01），表明金剛烷胺、利巴韋林、鹽酸嗎啉胍三種藥物有較強(qiáng)的細(xì)胞內(nèi)抑制病毒復(fù)制作用，而黃芪多糖和干擾素抑制復(fù)制作用較弱；藥物在阻斷PRRSV侵入Marc-145細(xì)胞時(shí)，結(jié)果顯示金剛烷胺、干擾素、黃芪多糖藥物組的OD值顯著大于病毒對(duì)照組(P＜0.01），說(shuō)明該三種藥物在細(xì)胞水平上有較強(qiáng)的抗病毒侵入細(xì)胞的作用，利巴韋林、鹽酸嗎啉胍只有在較高濃度有保護(hù)作用，其他濃度不明顯；藥物與病毒共同作用時(shí)，金