屎腸球菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化及其復(fù)合益生菌在豬中飼用效果的研究.pdf

1、屎腸球菌T-013是安徽天邦生物研究所保存的一株飼用益生菌，該菌株屬人和動(dòng)物腸道中正常的微生物，能起到促進(jìn)動(dòng)物健康生長的作用，在動(dòng)物養(yǎng)殖中具有很好的應(yīng)用前景。為推廣屎腸球菌T-013的工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用，本課題分7個(gè)系列試驗(yàn)，對(duì)屎腸球菌T-013液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基、發(fā)酵條件和多菌固態(tài)發(fā)酵進(jìn)行了研究，并將屎腸球菌T-013復(fù)合益生菌應(yīng)用在母豬、斷奶仔豬和生長豬飼料中，以考察其在豬生產(chǎn)中的應(yīng)用效果。
　　 試驗(yàn)1：屎腸球菌T-013發(fā)酵培

2、養(yǎng)基的優(yōu)化。為了實(shí)現(xiàn)屎腸球菌T-013在生產(chǎn)中的快速增殖，對(duì)培養(yǎng)基成分進(jìn)行了優(yōu)化。以培養(yǎng)基各成分對(duì)菌體生長的影響作為指標(biāo)，先采用單因素試驗(yàn)，確定最佳的碳源、氮源和無機(jī)鹽源，然后采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)碳氮源和無機(jī)鹽進(jìn)行了優(yōu)化。從而得到屎腸球菌T-013的最佳培養(yǎng)基成分組成是：葡萄糖0.5％，蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化鈉0.75％，檸檬酸銨0.3％，乙酸鈉0.2％。
　　 試驗(yàn)2：屎腸球菌T-013.培養(yǎng)條件的優(yōu)化。為了對(duì)屎腸球

3、菌T-013發(fā)酵過程中的培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，利用250mL的三角瓶，通過正交試驗(yàn)L9(34)進(jìn)行設(shè)計(jì)，對(duì)接種菌齡、培養(yǎng)溫度、初始pH值和接種量4因素進(jìn)行優(yōu)化。最終得到屎腸球菌T-013的最優(yōu)培養(yǎng)條件是：接種菌齡16h，培養(yǎng)溫度37℃，初始pH值為8.5和接種量是2％。利用最優(yōu)條件組合進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果表明在該條件下對(duì)屎腸球菌T-013的活菌數(shù)含量是3.8×109cfu/mL。
　　 試驗(yàn)3：屎腸球菌T-013抑菌效果的研究。為了進(jìn)

4、一步研究屎腸球菌T-013的抑菌性能以及復(fù)合菌種之間的影響，采用牛津杯法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，以測(cè)量抑制圈直徑的大小作為試驗(yàn)的主要考察指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果表明屎腸球菌T-013對(duì)大腸桿菌具有很好抑制作用，屎腸球菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌之間無抑制作用。
　　 試驗(yàn)4：屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑發(fā)酵條件的研究。為了研究屎腸球菌T-013、枯草芽孢桿菌和酵母菌在發(fā)酵培養(yǎng)基中的生長情況，采用復(fù)合菌種固態(tài)發(fā)酵法，以總菌數(shù)作為檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)

5、果表明以活菌總數(shù)作為目標(biāo)的最佳條件為：總接種量6％，發(fā)酵時(shí)間48h，發(fā)酵溫度37℃，葡萄糖添加量為1％，料水比1:1，菌種比例(屎腸球菌：枯草芽孢桿菌：酵母菌)2:1:1，原料比例(玉米：豆粕：玉米胚芽粕：大豆皮)1.5:2.5:3:3。
　　 試驗(yàn)5：屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑在母豬養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用。為研究添加屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑對(duì)母豬采食量、仔豬初生重及斷奶重等指標(biāo)的影響。選擇胎次和產(chǎn)期相近的經(jīng)產(chǎn)母豬1

6、4頭(懷孕85天左右)，分試驗(yàn)組和對(duì)照組兩組，對(duì)照組不添加，試驗(yàn)組添加5％屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑。每個(gè)處理組7個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭母豬，試驗(yàn)期為48天，每天飼喂2次，試驗(yàn)期自由飲水。結(jié)果表明：添加5％屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑能使母豬產(chǎn)后7天的采食量顯著提高，顯著提高仔豬的斷奶均重：試驗(yàn)組母豬糞樣中菌落總數(shù)極顯著提高，其中乳酸菌的含量顯著提高，大腸桿菌的含量則顯著減少。
　　 試驗(yàn)6：屎腸球菌T-013等復(fù)合

7、益生菌制劑在斷奶仔豬中的應(yīng)用。為研究基礎(chǔ)日糧中屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑的不同添加量對(duì)斷奶仔豬的生長性能、日糧養(yǎng)分表觀消化率、糞便微生物數(shù)量、血清指標(biāo)的影響。選用90頭(杜×長×大)體重(5.89±0.59)kg三元雜交斷奶仔豬，根據(jù)體重、窩別隨機(jī)分成3組：對(duì)照組(無添加)、試驗(yàn)Ⅰ組(添加3％屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑)、試驗(yàn)Ⅱ組(添加6％屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑)，每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭斷奶仔豬，

8、記錄每周斷奶仔豬的體重和耗料量，正試期為21d。結(jié)果表明：仔豬日糧中添加屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑均能提高日采食量和降低料重比，但結(jié)果差異都不顯著(P>0.05)，15-21d試驗(yàn)Ⅱ組顯著提高仔豬日增重、減少腹瀉率(P<0.05)，其他組之間無顯著性差異；試驗(yàn)Ⅱ組的粗蛋白質(zhì)和鈣的表觀消化率顯著提高(P<0.05)，其他養(yǎng)分表觀消化率差異不顯著；試驗(yàn)Ⅱ組能極顯著降低斷奶仔豬糞樣的pH值、減少大腸桿菌數(shù)量和增加乳酸菌的數(shù)量(P<0.

9、01)；試驗(yàn)Ⅱ組添加6％屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑能使血清尿素氮含量極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo)顯著優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。
　　 試驗(yàn)7：屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑在生長豬中的應(yīng)用。研究日糧中添加屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑對(duì)生長豬的生產(chǎn)性能、糞便微生物、環(huán)境指標(biāo)及血清指標(biāo)的影響。選用體重在(31.75±3.78)kg的杜×長×大三元雜交生長豬120頭，隨機(jī)分成對(duì)照組(

10、不添加)、試驗(yàn)Ⅰ組(添加3％屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑)和試驗(yàn)Ⅱ組(添加6％屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑)，每個(gè)處理組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭生長豬，正試期為28d。結(jié)果表明：生長豬日糧中添加屎腸球菌T-013等復(fù)合益生菌制劑能增加日采食量和日增重，降低料肉比，結(jié)果差異并不顯著(P>0.05)，但能顯著減少生長豬的腹瀉發(fā)生率(P<0.05)；試驗(yàn)Ⅱ組能夠極顯著降低糞樣pH和減少大腸桿菌數(shù)量，增加乳酸菌數(shù)量(P<0.01)；