EMS處理對甘藍(lán)型油菜的影響及Fad2基因的克隆和序列分析.pdf

1、利用物理化學(xué)誘變技術(shù)誘發(fā)植物發(fā)生突變是促進(jìn)遺傳變異的產(chǎn)生及創(chuàng)造新種質(zhì)的一種有效方法.它也是選育新品種的基礎(chǔ)。本實驗分別采用三種不同濃度EMS即0.5％、1％和1.5％處理甘藍(lán)型油菜湘油15號種子，研究對M<,1>和M<,2>代的生育期、產(chǎn)量構(gòu)成因素和品質(zhì)性狀的影響，并對其M2代進(jìn)行SRAP分子標(biāo)記及高油酸突變體Fad2基因克隆和序列分析，主要研究成果如下： 1.EMS濃度達(dá)到1.5％，處理時間在6h，種子的發(fā)芽率在57％左右，接

2、近半致死劑量，此濃度可作為甘藍(lán)型油菜EMS誘變的參考濃度。 2.在M<,1>代，1％和1.5％處理的一些性狀發(fā)生了改變，生育期比對照縮短；產(chǎn)量因素受到嚴(yán)重的影響，導(dǎo)致產(chǎn)量的下降；從整個處理來講，M<,1>代的脂肪酸品質(zhì)受到影響的程度不是很大，但出現(xiàn)了個別植株油酸高于70％； 0.5％處理和對照相比，各性狀無明顯的差異。在M<,2>代，1％和1.5％處理水平在生育期和產(chǎn)量性狀上還受到一定的影響，0.5％處理和對照相比，各性狀無明顯

3、的差異。 3.SRAP標(biāo)記分析表明，EMS處理后的材料在三個處理水平上都有不同程度的DNA序列的改變，和對照相比，1％和1.5％處理水平DNA發(fā)生改變的程度最大。 4.根據(jù)Genebank中甘藍(lán)型油菜(Brassica napus AACC=38)Fad2基因(.AY577313)的序列設(shè)計引物分別對經(jīng)EMS處理獲得的高油酸材料05-4(油酸含量71.5％)和對照材料(油酸含量60％)基因組DNA進(jìn)行了Fad2基因克隆。

4、測序后發(fā)現(xiàn)，無論是高油酸材料還是對照材料，都包括兩個Fad2基因(分別標(biāo)注為Fad2A和Fad2B)。將測序結(jié)果用DNAstar軟件進(jìn)行同源比對發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ad2B和白菜型油菜(Brassica campestrisAA=20)同源性為98.4％，而Fad2A和白菜型油菜同源性為91.6％。用DNAman軟件將測序得到的Fad2基因轉(zhuǎn)變成了383個氨基酸，用于氨基酸序列比對。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和對照相比，在高油酸材料(05-4)Fad2A中，第61