光周期途徑菊花成花相關(guān)基因的篩選及其表達(dá)分析.pdf

1、菊花(Chrysanthemummorifolium)是我國(guó)傳統(tǒng)名花，也是世界四大切花之一，其產(chǎn)量和銷量均位于世界花卉前列。
　　 本研究以目前國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)銷量最大的切花菊品種‘神馬’[Chrysanthemummorflorium(Ramat.)Kitam，‘Jinba’]為材料，利用cDNA-AFLP技術(shù)，對(duì)不同光周期處理的菊花莖尖基因表達(dá)圖譜進(jìn)行分析，分離并鑒定差異表達(dá)的基因，通過(guò)克隆測(cè)序，BLAST分析，獲得了6個(gè)可能與開

2、花相關(guān)的基因片段，為從分子水平上了解菊花花芽分化的分子機(jī)理，通過(guò)基因工程技術(shù)培育不同目標(biāo)花期的菊花新品種奠定基礎(chǔ)。主要研究成果如下：
　　 1、建立了適合菊花的cDNA-AFLP分析體系
　　 TRNzol法提取的RNA較完整，純度較高；采用Oligo(dT)18Primer及經(jīng)過(guò)改造和優(yōu)化的BeyoRTM-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶得到dscDNA，將1μg的cDNA利用EcoRI/MseI快速雙酶切5min，連接產(chǎn)物稀釋10倍

3、作為預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)的模板，擴(kuò)增30個(gè)循環(huán)，其檢測(cè)結(jié)果較理想；預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋50倍作為模板，采用Touchdown程序，選用64對(duì)AFLP引物進(jìn)行選擇性擴(kuò)增；擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)6％的PAGE電泳后采用改進(jìn)的快速銀染體系，得到了清晰可辨的cDNA-AFLP凝膠圖譜。本研究建立的反應(yīng)體系適用于菊花功能基因的cDNA-AFLP研究。
　　 2、利用所建立的cDNA-AFLP技術(shù)體系，篩選菊花開花相關(guān)基因
　　 64對(duì)引物組合檢測(cè)到2917個(gè)

4、cDNA片段，獲得差異表達(dá)的TDF共835個(gè)，其中584個(gè)為上調(diào)表達(dá)，251個(gè)為下調(diào)表達(dá)。對(duì)克隆測(cè)序成功的50個(gè)差異表達(dá)TDF進(jìn)行分析，結(jié)果表明，36個(gè)TDF可以在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中找到同源序列。其中31個(gè)TDF為已知功能的基因(dbEST登錄號(hào)：JG700127-JG700157)，5個(gè)TDF未找到同源序列。按照其功能分類，將31個(gè)差異表達(dá)基因分為7類：信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、分化發(fā)育、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白質(zhì)代謝、能量與代謝、抗病與防御等相關(guān)基因、未知或假