光周期途徑菊花成花相關基因的篩選及其表達分析.pdf

1、菊花(Chrysanthemummorifolium)是我國傳統(tǒng)名花，也是世界四大切花之一，其產(chǎn)量和銷量均位于世界花卉前列。
　　 本研究以目前國內外市場銷量最大的切花菊品種‘神馬’[Chrysanthemummorflorium(Ramat.)Kitam，‘Jinba’]為材料，利用cDNA-AFLP技術，對不同光周期處理的菊花莖尖基因表達圖譜進行分析，分離并鑒定差異表達的基因，通過克隆測序，BLAST分析，獲得了6個可能與開

2、花相關的基因片段，為從分子水平上了解菊花花芽分化的分子機理，通過基因工程技術培育不同目標花期的菊花新品種奠定基礎。主要研究成果如下：
　　 1、建立了適合菊花的cDNA-AFLP分析體系
　　 TRNzol法提取的RNA較完整，純度較高；采用Oligo(dT)18Primer及經(jīng)過改造和優(yōu)化的BeyoRTM-MuLV反轉錄酶得到dscDNA，將1μg的cDNA利用EcoRI/MseI快速雙酶切5min，連接產(chǎn)物稀釋10倍

3、作為預擴增反應的模板，擴增30個循環(huán)，其檢測結果較理想；預擴增產(chǎn)物稀釋50倍作為模板，采用Touchdown程序，選用64對AFLP引物進行選擇性擴增；擴增產(chǎn)物經(jīng)6％的PAGE電泳后采用改進的快速銀染體系，得到了清晰可辨的cDNA-AFLP凝膠圖譜。本研究建立的反應體系適用于菊花功能基因的cDNA-AFLP研究。
　　 2、利用所建立的cDNA-AFLP技術體系，篩選菊花開花相關基因
　　 64對引物組合檢測到2917個

4、cDNA片段，獲得差異表達的TDF共835個，其中584個為上調表達，251個為下調表達。對克隆測序成功的50個差異表達TDF進行分析，結果表明，36個TDF可以在NCBI數(shù)據(jù)庫中找到同源序列。其中31個TDF為已知功能的基因(dbEST登錄號：JG700127-JG700157)，5個TDF未找到同源序列。按照其功能分類，將31個差異表達基因分為7類：信號轉導、分化發(fā)育、轉錄調控、蛋白質代謝、能量與代謝、抗病與防御等相關基因、未知或假