不同來(lái)源纖維肉瘤的鑒別診斷及人工致病試驗(yàn).pdf

1、禽白血病病毒(avian leukosis viruses,ALV)是一種反轉(zhuǎn)錄病毒，在雞群中普遍存在，可造成1％～2％的成年雞誘發(fā)內(nèi)臟腫瘤并導(dǎo)致死亡。能感染雞的可分為A、B、C、D、E和J等6個(gè)亞型，臨床上常見(jiàn)J和A亞型，E亞型本身無(wú)致病性。過(guò)去十幾年，ALV病毒對(duì)肉用型雞、蛋用型雞和我國(guó)地方品系雞的感染給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。近幾年，雞白血病/血管瘤病例的顯著上升使該病成為危害我國(guó)蛋雞業(yè)的主要疫病之一，并在臨床上發(fā)現(xiàn)纖維肉瘤的典

2、型病例。本研究分別從臨床商品代海蘭褐蛋雞和實(shí)驗(yàn)室致病性試驗(yàn)SPF雞中，獲得兩例表現(xiàn)典型纖維肉瘤的病例，分別進(jìn)行了病毒分離鑒定及人工致病性試驗(yàn)研究。
　　 ⑴海蘭褐蛋雞急性纖維肉瘤的鑒別診斷及人工致病試驗(yàn)。2010年6月，山東新泰某商品代海蘭褐蛋雞場(chǎng)，存欄8000只，90d開(kāi)始發(fā)病，至240d死亡率在25％左右。其中有一只病雞（29號(hào)），在心臟后端，胸骨下緣有一肉瘤團(tuán)。本試驗(yàn)在此基礎(chǔ)上，采集此腫瘤病料，進(jìn)行病毒分離、鑒定并進(jìn)行人工

3、致病試驗(yàn)。①獲取的腫瘤病料研磨濾過(guò)液接種DF-1細(xì)胞，培養(yǎng)5-7 d后傳代，加到有蓋玻片的平皿中，再繼續(xù)培養(yǎng) 5-7 d，取細(xì)胞培養(yǎng)上清用禽白血病病毒p27抗原檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ALV p27抗原，蓋玻片上抗原陽(yáng)性上清的細(xì)胞固定，分別用JE9、11B154、H19及用抗ALV-A/B gp85的小鼠血清對(duì)蓋玻片上的單層細(xì)胞分別做IFA，表明腫瘤病料存在ALV-J的明顯的感染，可能存在ALV-A/B亞群的感染，但是不存在MDV和REV的感染。

4、②腫瘤組織病理組織學(xué)顯示均為纖維細(xì)胞樣肉瘤，纖維排列凌亂，細(xì)胞大小不一。③ALV分離株的前病毒基因組DNA中擴(kuò)增2.2kb包括部分LTR區(qū)和完整env基因的片段，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)克隆、測(cè)序后，利用DNAStar軟件對(duì)基因產(chǎn)物進(jìn)行序列分析。④ALV分離株的gp85基因編碼的氨基酸序列與11株ALV-J亞群參考株的同源性均在87.5％以上，而與ALV-A、B、C、D、E亞群參考株的同源性僅在37.6％-40.1％之間，進(jìn)化樹(shù)分析也顯示分離株

5、與ALV-J亞群參考株的同源關(guān)系最近。這表明分離株屬于ALV-J亞群病毒。⑤此毒株的gp37編碼的氨基酸序列與J亞型參考株的同源性在92.7％～94.9％范圍內(nèi)，同源性較高。與其他亞群的同源性在59.0％-60.8％之間。⑥不同日齡的雞在2種注射方式均能復(fù)制出腫瘤，僅是腫瘤出現(xiàn)的時(shí)間不同；1d、14d能在10d左右出現(xiàn)，180d后在20d左右出現(xiàn)；但腫瘤的發(fā)生率和致死率均為100％。頸部皮下注射組除了引起頸部皮下腫瘤，還會(huì)引起胸腺和脾臟

6、的萎縮，甚至是肝臟或者脾臟的肉瘤或血管瘤；腹腔注射組除了在肌胃和腸系膜上看到明顯的腫瘤結(jié)節(jié)外，有的還可以引起肝臟和脾臟的肉瘤和血管瘤，但不能引起頸部皮下的腫瘤。⑦1d海蘭褐雞腫瘤的生長(zhǎng)，在攻毒開(kāi)始后一個(gè)星期內(nèi)沒(méi)有任何變化，生長(zhǎng)至9d，大部分雞可以在頸部皮下用手觸摸到米粒大小的團(tuán)塊，隨后幾天腫瘤生長(zhǎng)迅速，5d-6d后直徑可達(dá)到30多毫米。⑧人工致病性試驗(yàn)生長(zhǎng)出的腫瘤，按原始腫瘤組織的處理方法進(jìn)行病毒的分離鑒定及腫瘤組織的形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果表

7、明，人工致病性試驗(yàn)獲得腫瘤存在ALV-J的明顯的感染，可能存在ALV-A/B亞群的感染，但是不存在MDV和REV的感染。腫瘤病料、觸片，吉姆薩染色和病理組織學(xué)觀察看出，腫瘤細(xì)胞個(gè)體不均一，形狀多樣，細(xì)胞核較大、濃染，有的可以發(fā)現(xiàn)明顯的核分裂相；為典型的纖維細(xì)胞樣肉瘤。
　　 ⑵一例A亞型禽白血病病毒引起SPF雞纖維瘤的病理學(xué)和病毒學(xué)分析。SDAU09C3是分離于海蘭褐蛋雞的ALV-A亞群毒株，人工卵黃囊接種5dSPF雞胚3000

8、TCID50，生長(zhǎng)至7個(gè)月人工剖殺獲得腎臟和肝臟表現(xiàn)明顯局灶性大結(jié)節(jié)的典型病例。①I(mǎi)FA檢測(cè)結(jié)果表明，腎臟和肝臟腫瘤存在ALV-A/B的感染，但不存在ALV-J、MDV、REV感染。肝臟和腎臟分離株與原攻毒株囊膜蛋白gp85基因編碼的氨基酸序列同源性為99.5％。②SDAU09C3毒株引起的腫瘤，主要膠原纖維較少，細(xì)胞及纖維排列極不規(guī)則，為纖維細(xì)胞肉瘤。③肝臟和腎臟的腫瘤研磨濾過(guò)液，攻1日齡SPF雞后，連續(xù)觀察至75日齡，肝臟、腎臟腫瘤