上海和內(nèi)蒙古地區(qū)輸血性傳播病毒的流行病學(xué)調(diào)查及ORF1基因的克隆表達(dá).pdf

1、輸血型傳播病毒（Torque Teno virus，TTV)是由Nishizawa[1]于1997年在研究原因不明肝炎患者的過(guò)程中，用RDA（代表性差異技術(shù)）方法從一名58歲的日本患者血液中分離到的一種病毒，是繼甲、乙、丙、丁、戊、己、庚之后的又一肝炎病毒--辛型肝炎病毒，從屬與指環(huán)病毒科（Anellovirida）。該病毒為單股環(huán)狀DNA，病毒基因組長(zhǎng)度在2.1-3.9 KB之間，有兩個(gè)主要的開(kāi)放閱讀框（ORF）,ORF1可能編碼病毒

2、的主要結(jié)構(gòu)蛋白，ORF2主要編碼非結(jié)構(gòu)蛋白。TTV能感染人、非人靈長(zhǎng)類、豬、犬、貓、牛、羊、駱駝等哺乳動(dòng)物，對(duì)禽類的感染也有報(bào)道，但是，TTV的大小及特性在不同物種中差異較大，僅人的TTV就存在40多個(gè)基因型。TTV感染范圍較寬，傳播途徑較廣，與人類隱性肝病密切相關(guān)，因此引起了世界各國(guó)學(xué)者的廣泛關(guān)注。
　　本試驗(yàn)根據(jù)GeneBank公開(kāi)發(fā)表的SAa-10（AB060594）全序列設(shè)計(jì)型特異性引物，通過(guò)巢式PCR方法檢測(cè)來(lái)自上海某兒

3、童醫(yī)院的150份、年齡在1個(gè)月到8歲之間的兒童糞樣和109份成年人血樣，來(lái)自內(nèi)蒙的96份中老年人的糞樣，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：內(nèi)蒙96份中老年人糞樣中沒(méi)有陽(yáng)性樣品，上海150份兒童糞樣中檢測(cè)到3份，上海109份血樣中有8份陽(yáng)性，陽(yáng)性樣品的序列與SAa-10序列以及不同陽(yáng)性樣品序列間的同源性均在90％以上，說(shuō)明TTV的感染不存在地域差異性，但是，感染率可能與年齡有一定的相關(guān)性。
　　參照SAa-10（AB060594）對(duì)其中一份陽(yáng)性樣品進(jìn)行全序

4、列擴(kuò)增，命名為L(zhǎng)-SH(HM224451)，通過(guò)Cluster比對(duì)及Mega4.0進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)分析表明，本實(shí)驗(yàn)分離株L-SH(HM224451)與日本株SAa-10（AB060594）的同源性達(dá)93.8%，進(jìn)一步說(shuō)明了同一基因型TTV之間不存在地域差異。對(duì)分離株L-SH ORF1中的蛋白,運(yùn)用DNA-Star中Protean軟件進(jìn)行抗原表位分析，選取抗原表位密集的區(qū)域設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，并連接到表達(dá)載體PET-30中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。結(jié)