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文檔簡介
1、甜葉菊屬于小型的經(jīng)濟(jì)作物,其分子生物學(xué)研究剛剛起步。本文開展了甜葉菊分子標(biāo)記遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建研究,為今后甜葉菊QTL定位、基因定位與克隆、基因組學(xué)研究和標(biāo)記輔助選擇育種奠定基礎(chǔ)。具體研究結(jié)果如下:
由于在構(gòu)建甜葉菊分子圖譜時缺乏足夠的分子標(biāo)記,本研究進(jìn)行了基于甜葉菊轉(zhuǎn)錄組和基因組DNA的分子標(biāo)記開發(fā)工作。實(shí)驗(yàn)中利用現(xiàn)有的甜葉菊EST數(shù)據(jù)庫,篩選出其中特異SSR序列并分析其在數(shù)據(jù)庫中的分布特征,進(jìn)而展開甜葉菊EST-SSR
2、功能性標(biāo)記的開發(fā)與利用研究。在總長為3.75 Mb甜葉菊EST序列內(nèi)共確認(rèn)得到5573條非冗余序列,平均每隔13.2 kb即含有一個EST-SSR。實(shí)驗(yàn)中共篩選出285個EST-SSR序列,其中二核苷酸重復(fù)序列出現(xiàn)的頻率最高,占56.5%,四核苷酸重復(fù)序列最低,占0.3%。利用含SSR的EST序列,本研究共設(shè)計開發(fā)了58對EST-SSR引物。在分析前人建立的SRAP標(biāo)記PCR體系基礎(chǔ)上,本試驗(yàn)建立并優(yōu)化了甜葉菊SRAP-PCR反應(yīng)體系,
3、其dNTPs濃度為0.2 mmol/L,Tap酶濃度為0.5 U/μl,DNA濃度為1.2μmol/L。參照前人的SRAP研究成果,設(shè)計了上下游引物各19條,形成了361對SRAP引物組合。
利用兩個不同來源的甜葉菊栽培品種構(gòu)建了含410個單株的F1分離群體,通過EST-SSR和SRAP標(biāo)記在親本及F1分離群體篩選及分析,構(gòu)建了總長分別為1215.2cM和647.8cM甜葉菊大葉材料和小葉材料兩張分子遺傳圖譜。大葉材料圖譜
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