小麥葉片胞間液蛋白的分離分析研究.pdf

1、植物細胞間隙液蛋白在植物的生長發(fā)育、抗病抗逆反應等各種生物學過程中具有十分重要的作用，由于植物中的細胞間隙液蛋白質含量低，而且細胞膜容易破損，所以其提取與分離工作難以有效開展。本文旨在建立一種有效的適合小麥葉片細胞間隙液蛋白質的提取方法，并運用蛋白質組學的多種研究方法對小麥葉片細胞間隙液蛋白質進行分離，為開展小麥葉片細胞間隙液蛋白質在小麥生長發(fā)育、抗病抗逆等方面的研究提供了新的研究方式。
　　 首先，本文篩選優(yōu)化出了較為合適的小

2、麥葉片細胞間隙液蛋白質的提取方法。結果顯示：以50 mMNaAC作為提取緩沖液，負壓處理小麥葉片20 min，以40×g離心5 min除去提取緩沖液后，再以2000×g離心15 min收集細胞間隙液，可以得到較好的提取效果。收集細胞間隙液，冷凍干燥后，以SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測并分離小麥葉片細胞間隙液的蛋白質。把SDS-PAGE分離所得的44條細帶分別切下并酶切后，進行MALDI-TOF/TOF二級質譜分析，共鑒定出27種蛋白質，其

3、中有些蛋白質是被報道過的定位于細胞間隙的蛋白質。
　　 將小麥葉片全蛋白和細胞間隙液蛋白進行二維電泳(2-DE)分離，重復三次取平均值，分別檢測到1247和522個蛋白點。而采用2D-DIGE技術分離全蛋白能夠檢測到1376個蛋白點，提高了定量的準確性并能夠發(fā)現(xiàn)更多的蛋白點。
　　 高效液相色譜技術可以彌補SDS-PAGE以及2-DE技術的缺陷。為了最大范圍的分離分析細胞間隙液蛋白的成分，本文初步探索了HPLC技術分離小