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文檔簡介
1、植物根系分泌物,即植物根系分泌到其生長基質中的物質,是植物與土壤微環(huán)境進行物質、能量和信息交流的重要媒介。植物根系分泌蛋白有可能在調節(jié)根際微環(huán)境方面起著關鍵作用。開展對油菜根系分泌蛋白的研究有助于了解植物體對生長環(huán)境的調節(jié)適應機制。
植物胞間液或間質液,即植物細胞之間的液體,作為細胞原生質體與環(huán)境之間溝通的橋梁,對細胞的生長代謝有重要意義。胞間液中的蛋白質,表現(xiàn)出胞間液多種生理生化功能。對植物胞間液中蛋白的解析向植物逆境生理領
2、域提供了新的視角。
本研究以甘藍型油菜“鼎油雜4號”為實驗材料,建立和優(yōu)化了植物根系分泌物和胞間液蛋白的收集和制備方法,利用以雙向電泳和質譜為主要技術的蛋白質組學分析平臺,進行油菜根系分泌蛋白和葉片胞間液蛋白相關研究。取得的主要研究結果如下:
1、優(yōu)化了適用于收集油菜根系分泌物的幼苗無菌水溶液培養(yǎng)及檢測體系。在油菜幼苗無菌水溶液培養(yǎng)方法基礎上,將培養(yǎng)與無菌檢測同時進行,簡化了操作步驟,縮短了實驗周期,降低了污染率。<
3、br> 2、優(yōu)化了根系分泌蛋白提取方法。針對根系分泌蛋白含量低、次生化合物較多的特點,改進了三氯醋酸-丙酮蛋白提取方法,引入了月硅酸鈉鹽作為蛋白沉淀載體,獲得了較好的蛋白提取效果。
3、利用以雙向電泳和質譜鑒定為核心的蛋白質組學分析平臺,對油菜根系分泌蛋白進行蛋白質組學分析。利用雙向電泳技術,對根系分泌蛋白進行分離,獲得了背景清晰的油菜根系分泌蛋白表達圖譜。利用MALDI-TOF-MS/MS技術和生物信息學方法,進行蛋白同源
4、性分析,鑒定出11種蛋白,結合相關蛋白數(shù)據(jù)庫和文獻對其生理、生化功能進行查詢,表明多數(shù)根系分泌蛋白與植物次生代謝或防御相關。
4、初步建立了油菜葉片胞間液的制備方法?;跐B透-離心方法,利用雙離心管裝置提取油菜葉片胞間液。葉綠素濃度測定實驗結果表明:植物胞間液葉綠素濃度低于全葉片中葉綠素濃度的3%。
5、對油菜葉片胞間液蛋白進行雙向電泳分離,獲得了背景清晰的雙向電泳分離圖譜。利用圖像分析軟件對低磷脅迫下油菜葉片胞間液
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