口腔鱗癌癌變相關(guān)分子蛋白組學(xué)分析及RACK1蛋白表達(dá)驗(yàn)證和功能研究.pdf

1、研究背景： 口腔鱗癌占口腔惡性腫瘤的90％，每年全世界約有50萬(wàn)新發(fā)病例，而其中只有50％的患者達(dá)到5年生存率?？谇击[癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移是多步驟、多基因參與的結(jié)果，雖已有大量的研究從基因水平和轉(zhuǎn)錄水平對(duì)鱗癌進(jìn)行研究，但其癌變的分子機(jī)制仍不十分明確，臨床也缺乏有效的用于鱗癌早期診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)的特異分子標(biāo)志物及靶向治療藥物。因此高效率、高通量地篩查與口腔鱗癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)蛋白，并對(duì)其在腫瘤發(fā)生與防治中的作用進(jìn)行深入研究，這必

2、將有助于全面揭示口腔鱗癌的癌變機(jī)制，并最終應(yīng)用于臨床診斷、篩檢、預(yù)后與治療。 研究目的： 通過(guò)口腔鱗癌與癌旁正常組織的差異蛋白組學(xué)研究，高通量篩選與口腔鱗癌相關(guān)的候選分子標(biāo)記物并對(duì)其進(jìn)行表達(dá)驗(yàn)證和功能分析，以尋求有效的診斷預(yù)后標(biāo)記和藥物靶標(biāo)。 研究方法： ①運(yùn)用雙向電泳．質(zhì)譜．生物信息學(xué)為核心的蛋白組學(xué)技術(shù)，分析20例手術(shù)切除的新鮮口腔鱗癌組織及其癌旁正常組織的蛋白表達(dá)譜，鑒定表達(dá)差異蛋白。 ②選

3、取其中的RACK1 (receptor for activated c-kinase 1)蛋白進(jìn)行免疫組化表達(dá)驗(yàn)證，評(píng)估其在口腔正常組織，不同異常增生程度的口腔白斑組織及口腔鱗癌組織中的表達(dá)。 ③運(yùn)用RNA干擾技術(shù)抑制口腔鱗癌細(xì)胞RACKl基因表達(dá)，觀察其對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞凋亡的影響。 研究結(jié)果： ①雙向電泳得到 20 對(duì)口腔鱗癌及配對(duì)癌旁正常組織的蛋白圖譜。經(jīng) PDQuest分析軟件選取差異點(diǎn)并定量分析，得到134

4、個(gè)重復(fù)表達(dá)，差異量大于1.5倍的差異點(diǎn)。ESI-Q-TOF質(zhì)譜成功鑒定120個(gè)蛋白點(diǎn)，合并相同蛋白共得到77個(gè)蛋白，57個(gè)蛋白在腫瘤中表達(dá)量上調(diào)，20個(gè)下調(diào)。其中，有多個(gè)蛋白在腫瘤組織或口腔鱗癌中第一次檢出。 ②免疫組化顯示：RACKl蛋白在口腔正常組織、口腔白斑組織、口腔鱗癌中的染色值分別為1.30±1.26，2.244±2.12，5.78±2.56。隨著異常增生程度增加，RACK1表達(dá)量遞增，具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.00)。

5、OSCC轉(zhuǎn)移組較未轉(zhuǎn)移組RACK1表達(dá)量增加，具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.003)。 ③RNA干擾沉默RACKl基因可顯著上調(diào)口腔鱗癌細(xì)胞的凋亡。 研究結(jié)論： ①蛋白組學(xué)技術(shù)可高通量篩選口腔鱗癌發(fā)生中的差異表達(dá)蛋白，這些蛋白均可作為潛在的分子標(biāo)記物進(jìn)行深入研究； ②RACKl蛋白隨著異常增生程度增加而表達(dá)量遞增，可作為臨床診斷分子標(biāo)記物； ③RACKl蛋白表達(dá)量OSCC轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組，可作為臨床