口腔鱗癌癌變相關(guān)分子蛋白組學分析及RACK1蛋白表達驗證和功能研究.pdf

1、研究背景： 口腔鱗癌占口腔惡性腫瘤的90％，每年全世界約有50萬新發(fā)病例，而其中只有50％的患者達到5年生存率?？谇击[癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移是多步驟、多基因參與的結(jié)果，雖已有大量的研究從基因水平和轉(zhuǎn)錄水平對鱗癌進行研究，但其癌變的分子機制仍不十分明確，臨床也缺乏有效的用于鱗癌早期診斷和預(yù)后監(jiān)測的特異分子標志物及靶向治療藥物。因此高效率、高通量地篩查與口腔鱗癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)蛋白，并對其在腫瘤發(fā)生與防治中的作用進行深入研究，這必

2、將有助于全面揭示口腔鱗癌的癌變機制，并最終應(yīng)用于臨床診斷、篩檢、預(yù)后與治療。 研究目的： 通過口腔鱗癌與癌旁正常組織的差異蛋白組學研究，高通量篩選與口腔鱗癌相關(guān)的候選分子標記物并對其進行表達驗證和功能分析，以尋求有效的診斷預(yù)后標記和藥物靶標。 研究方法： ①運用雙向電泳．質(zhì)譜．生物信息學為核心的蛋白組學技術(shù)，分析20例手術(shù)切除的新鮮口腔鱗癌組織及其癌旁正常組織的蛋白表達譜，鑒定表達差異蛋白。 ②選

3、取其中的RACK1 (receptor for activated c-kinase 1)蛋白進行免疫組化表達驗證，評估其在口腔正常組織，不同異常增生程度的口腔白斑組織及口腔鱗癌組織中的表達。 ③運用RNA干擾技術(shù)抑制口腔鱗癌細胞RACKl基因表達，觀察其對口腔鱗癌細胞凋亡的影響。 研究結(jié)果： ①雙向電泳得到 20 對口腔鱗癌及配對癌旁正常組織的蛋白圖譜。經(jīng) PDQuest分析軟件選取差異點并定量分析，得到134

4、個重復(fù)表達，差異量大于1.5倍的差異點。ESI-Q-TOF質(zhì)譜成功鑒定120個蛋白點，合并相同蛋白共得到77個蛋白，57個蛋白在腫瘤中表達量上調(diào)，20個下調(diào)。其中，有多個蛋白在腫瘤組織或口腔鱗癌中第一次檢出。 ②免疫組化顯示：RACKl蛋白在口腔正常組織、口腔白斑組織、口腔鱗癌中的染色值分別為1.30±1.26，2.244±2.12，5.78±2.56。隨著異常增生程度增加，RACK1表達量遞增，具統(tǒng)計學差異(P=0.00)。

5、OSCC轉(zhuǎn)移組較未轉(zhuǎn)移組RACK1表達量增加，具統(tǒng)計學差異(P=0.003)。 ③RNA干擾沉默RACKl基因可顯著上調(diào)口腔鱗癌細胞的凋亡。 研究結(jié)論： ①蛋白組學技術(shù)可高通量篩選口腔鱗癌發(fā)生中的差異表達蛋白，這些蛋白均可作為潛在的分子標記物進行深入研究； ②RACKl蛋白隨著異常增生程度增加而表達量遞增，可作為臨床診斷分子標記物； ③RACKl蛋白表達量OSCC轉(zhuǎn)移組顯著高于未轉(zhuǎn)移組，可作為臨床