遲緩愛(ài)德華菌外膜蛋白的蛋白組學(xué)分析.pdf

1、遲緩愛(ài)德華菌是水產(chǎn)動(dòng)物的主要致病菌，可導(dǎo)致多種淡水魚(yú)和海洋魚(yú)出現(xiàn)全身性出血性敗血、皮膚腫脹腐爛、臟器的壞死等病征，造成大批量死亡，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究試圖發(fā)現(xiàn)遲緩愛(ài)德華菌的共同抗原，為遲緩愛(ài)德華亞單位疫苗的研發(fā)提供條件。
　　首先，本研究采用Sarkosyl法提取遲緩愛(ài)德華菌ET-202的外膜蛋白，利用雙向電泳技術(shù)得到其外膜蛋白圖譜，切取143個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，共檢測(cè)到66個(gè)蛋白點(diǎn)。通過(guò)Swiss.Prot在

2、線數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)這些蛋白點(diǎn)進(jìn)行功能分析和亞細(xì)胞定位。從中發(fā)現(xiàn)5個(gè)與毒力相關(guān)的蛋白分別定位在分泌系統(tǒng)、細(xì)胞膜和外周胞質(zhì)，12個(gè)與運(yùn)輸相關(guān)的外膜蛋白定位在細(xì)胞外膜，3個(gè)與抗菌素耐藥性有關(guān)的蛋白定位在細(xì)胞內(nèi)膜；并發(fā)現(xiàn)定位在細(xì)胞質(zhì)中的一些與核酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂類(lèi)等代謝有關(guān)的蛋白。為遲緩愛(ài)德華菌的致病機(jī)制的研究提供了參考。
　　其次，為了找出不同來(lái)源菌株之間的共同抗原，用本實(shí)驗(yàn)室已制備的4種針對(duì)不同來(lái)源遲緩愛(ài)德華菌外膜蛋白的牙鲆抗

3、血清對(duì)遲緩愛(ài)德華菌ET-202的OMPs2DE膠進(jìn)行Western-blotting分析發(fā)現(xiàn)在50kDa-36kDa處有4個(gè)能被4種抗血清識(shí)別的蛋白，而對(duì)照組也出現(xiàn)這四個(gè)免疫反應(yīng)點(diǎn)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證，我們又采集真鯛血清、石斑魚(yú)血清和不同來(lái)源牙鲆血清進(jìn)行Western-blotting分析，結(jié)果顯示這些血清均可識(shí)別ET-202 OMPs50kDa-36kDa處的這四個(gè)蛋白。推測(cè)未免疫魚(yú)受易感病原菌的侵染，而病原菌的抗原蛋白可能存在共同的抗原

4、表位。
　　為了進(jìn)一步研究不同病原菌的共同抗原。本實(shí)驗(yàn)利用雙向電泳、Western-blotting和質(zhì)譜技術(shù)對(duì)遲緩愛(ài)德華菌、嗜水氣單胞菌、創(chuàng)傷弧菌和溶藻弧菌四種菌的外膜蛋白進(jìn)行蛋白組學(xué)分析。四種菌的1D SDS-PAGE圖顯示在50kDa-36kDa之間有相似的條帶，利用雙向電泳技術(shù)的到其外膜蛋白的2DE圖譜，并通過(guò)Western-blotting驗(yàn)證，其50kDa-36kDa之間均有能被同種抗血清共同識(shí)別的蛋白點(diǎn)，而同時(shí)未免疫