抑郁癥的腦功能磁共振和蛋白組學(xué)研究.pdf

1、許多研究和臨床實(shí)踐證明，神經(jīng)病學(xué)和精神病學(xué)這兩個(gè)學(xué)科，在科研方向、研究方法、理論體系、診斷和治療手段上交叉越來越多。神經(jīng)科醫(yī)生在臨床工作中接診大量精神領(lǐng)域的患者；為數(shù)不少的神經(jīng)科疾病以精神癥狀為首發(fā)表現(xiàn)或伴發(fā)精神癥狀；及時(shí)識(shí)別和處理神經(jīng)疾病伴發(fā)的精神癥狀可促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)；而且一直被定義為“功能性”疾病的精神分裂癥和情感障礙也顯示了腦器質(zhì)性改變的基礎(chǔ)。所以，學(xué)科間廣泛的合作和交流，神經(jīng)科醫(yī)生兼具精神科知識(shí)，是深入認(rèn)識(shí)腦的疾病以及認(rèn)知行

2、為障礙的前提，也是今后學(xué)科發(fā)展的方向。 目的: 本實(shí)驗(yàn)旨在應(yīng)用神經(jīng)科學(xué)的研究思路和方法，探討神經(jīng)科常見精神障礙抑郁癥的發(fā)病機(jī)制。通過設(shè)計(jì)能反映抑郁癥患者核心臨床表現(xiàn)的情感語言刺激模式，觀察首發(fā)重度抑郁癥患者的fMRI激活腦區(qū)，并在激活區(qū)域鑒定差異表達(dá)蛋白質(zhì)，以揭示抑郁癥發(fā)病機(jī)制的器質(zhì)性腦代謝基礎(chǔ)，為深入研究神經(jīng)科疾病伴發(fā)的其他精神障礙研究和腦的高級(jí)認(rèn)知功能研究提供范例，并為神經(jīng)精神病學(xué)的發(fā)展做一有益探索。 方法:

3、 本實(shí)驗(yàn)分三部分：第一部分，首發(fā)重度抑郁癥患者的腦功能磁共振研究；第二部分，抑郁癥動(dòng)物模型的制備；第三部分，抑郁大鼠海馬組織的腦蛋白組學(xué)研究。主要方法及技術(shù)路線如下： 1．根據(jù)抑郁癥患者的核心臨床表現(xiàn)——情感障礙和思維語言障礙，建立功能磁共振(fMRI)情感語言語境聯(lián)想刺激模式。 2．按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)收集重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院精神科及心理咨詢門診初診病人 20 例，經(jīng)美國精神障礙診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第四版(DSM-

4、Ⅳ)確診。年齡、性別構(gòu)成比一致的健康對(duì)照20例。所有研究對(duì)象用自制調(diào)查表嚴(yán)格篩選和隨訪。用 24 項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表(HAMD-24)評(píng)定患者病情嚴(yán)重程度。用漢語失語癥成套測驗(yàn)(ABC)對(duì)患者的語言障礙進(jìn)行評(píng)定。常規(guī)頭顱磁共振(MRI)掃描，排除顱內(nèi)結(jié)構(gòu)異常。在初發(fā)病未用藥階段，采用情感語言語境聯(lián)想刺激模式，揭示抑郁癥患者發(fā)病機(jī)制的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)。 3．成年雄性Sprague-Dawley 大鼠10只，隨機(jī)分為抑郁組和對(duì)照組，抑

5、郁組采用慢性不可預(yù)見輕度刺激(CUMS)，制作抑郁癥動(dòng)物模型。7 種不同刺激交替出現(xiàn) 21 天后，進(jìn)行曠野試驗(yàn)(OFT)和蔗糖水消耗試驗(yàn)(SWCT)，判斷造模是否成功。 4．參照本研究中抑郁癥患者的激活腦區(qū)，在模型動(dòng)物上取相應(yīng)區(qū)域腦組織，樣品經(jīng)預(yù)處理，用三氯乙酸法(TCA)提取腦組織蛋白質(zhì)，以 Bradford 法測定蛋白濃度、雙向凝膠電泳分離蛋白點(diǎn)、考馬斯亮藍(lán)染色和銀染。將圖象分析的差異蛋白質(zhì)斑點(diǎn)脫色，膠上原位酶切，進(jìn)行基質(zhì)輔

6、助激光解析/電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)分析。所得數(shù)據(jù)在NCBInr數(shù)據(jù)庫檢索、鑒定蛋白質(zhì)。 結(jié)果: 1.HAMD-24 評(píng)定患者為重度抑郁癥，且HAMD-24量表因子分和ABC評(píng)價(jià)，提示抑郁癥患者有明顯的情緒障礙和思維阻滯，思維貧乏，言語緩慢，反應(yīng)遲鈍，注意力難以集中，主動(dòng)性減退，交流困難。常規(guī)頭顱MRI掃描，未見顱內(nèi)結(jié)構(gòu)異常。 2.按照情緒的三個(gè)主要維度理論，篩選了能引起正性、負(fù)性、中性情緒

7、的二字漢語詞匯，建立了情感語言語境聯(lián)想刺激模式。 3.重度抑郁患者的負(fù)性任務(wù)主要激活了右額葉眶回(BA11)、左額葉直回(BA11)、左額中央前回(BA6)、右頂中央后回(BA40)、左扣帶后回、左尾狀核頭和右小腦前葉。正性任務(wù)主要激活了左頂楔前葉、右顳上回(BA38)、左顳上回(BA38)、右海馬回、右海馬鉤回(BA34)、右尾狀核頭、左尾狀核體、右島葉(BA13)和右枕梭狀回(BA37)。 4.3周造模結(jié)束時(shí)，抑郁組

8、大鼠的糖水消耗量，水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)都明顯下降，和對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)。 5.抑郁組大鼠海馬組織蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)分別為1594、 1624、 1609，平均為1609.00±15.00點(diǎn)，正常組大鼠海馬組織蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)分別為1571、1628、1648，平均為1615.67±29.78點(diǎn)。兩組2-DE圖譜的匹配率為72％，其中27個(gè)蛋白點(diǎn)在兩組間有顯著的量的改變。差異點(diǎn)集中在pH4.0～9.7，分子量集中在25～7

9、0KD。 6.查詢數(shù)據(jù)庫鑒定了15個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，其中鈣網(wǎng)織蛋白前體、原肌球蛋白1、雙重特異性的活化分裂素蛋白激酶激酶1和細(xì)胞分裂素活化蛋白激酶1，這4個(gè)與神經(jīng)發(fā)生相關(guān)蛋白表達(dá)較正常組顯著下降(P<0.05)。 結(jié)論: 1．重度抑郁癥患者有明顯的情感語言障礙，情感語言語境聯(lián)想刺激模式能很好的反映未用藥物初發(fā)重度抑郁癥患者的腦激活模式。 2．CUMS 模型抑郁動(dòng)物表現(xiàn)出的抑郁狀態(tài)、活動(dòng)能力下降、興趣喪失與人