馬鈴薯AGPase小亞基反義cDNA表達和轉(zhuǎn)化載體的構建.pdf

1、寧夏大學碩士學位論文馬鈴薯AGPase小亞基反義cDNA表達和轉(zhuǎn)化載體的構建姓名：萬巧鳳申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：姚新靈20060401A b s t r a c tA D P a s e —g l u c o s e p y r o p h o s p h o r y l a s e ( A G P a s e ) i sa k e y r e g u l a t o r y e n z y m e o f

2、 b a c t e r i a lg l y c o g e na n d p l a n ts t a r c hb i o s y n t h e s i s ．I tc a t a l y z e st h ef o r m a t i o no f A D P - g l u c o s ef r o mg l u c o s e1 ．p h o s p h a t e ( G I c - I —P ) a n dA T P

3、w i t ht h ec o n c o m i t a n t r e l e a s eo fp y r o p h o s p h a t e ( P P i ) ．T h ep r o d u c tA G P ．g l u c o s e t h e n S e r v e s a s t h e g l u c o s y l d o n o r f o rt h e f o r m a t i o no f “1 4 )

4、 g l u c o s lc h a i n s b yg l y c o g e n ／s t a r c hs y n t h a s e ．B o t hb a c t e r i a la n d p l a n tA G P a s ea c t i v i t i e sa r ea l l o s t e r i c a l l yr e g u l a t e db ys m a l l e f f e c t i n

5、 g m o l e c u l e s p r o d u c e d b yc a r b o n a s s i m i l a t o r y p m h w a y ．A G P ∞ei n p o t a t o i s ah e t e r o t e t r a m e rc o m p o s e do f t w ol a r g e ( L S U ，5 1 k D ) a n dt w os m a l l (

6、S S U ，5 0 k O ) s u b u n i t s ．T h el a r g ea n d s m a l ls u b u n i t sa c tm a i n l yi np a r to f r e g u l a t i o n a n d s y n t h e s i s ，r e s p e c t i v e l y ．T or e v e a l m e c h a n i s mo f s t o

7、r a g e s t a r c h a c c u m u l a t i o ni n p l a n t ，p r e v i o u s i n v e s t i g a t i o n so fA G P a s em a i n l y f o c u s e do nt r a n s c r i p t i o n r e g u l a t i o n o fg e n e se n c o d i n gA G

8、P a ．s e ，s e n s i t i v i t yo fA G P 笛e t oa l l o s t e r i ce f f e c t o r sa n d s u b s t r a t e ，r e d o x r e g u l a t i o no f p o s t t r a n s l a t i o n a n dr e c o m b i n a t i o no fh e t e r o g e n

9、 i c g e n e s ．M e a n w h i l e ，s t u d i e ss h o w e dt h a t e x p r e s s i o no fa n t i s e n s e S S U i n s t o r a g et i s s u eo f t r a n s g e n i cp l a n tl e dt o i n h i b i t i o no f s t a r c hb i

10、o s y n t h e s i s ．I no r d e rt oe x p r e s sb e t e m g e n i cg e n ei nm u t a n t so f s t a r c hb i o s y n t h e s i sa n d t o d i s t i n g u i s hA G P a s e e x p r e s s i o no f m u t a n t s o f s t a r

11、 c hb i o s y n t h e s i s i n p o t a t o ，i t i s p r e r e q u i s i t e t o o b t a i n t h e p o t a t o m u t a n t s i n s t a r c h b i o s y n t h e s i s ．T h e r e f o r e ，t h eo b j e c t i v eo f t h i sr

12、e s e a r c h i s t o c o n s t r u c tp l a n tt r a n s f o r m a t i o nv e c t o r sc o n t a i n i n ga n t i s e n s eS S U f u s i n gg e n e sw i t hf e a t u r eo f s p e c i f i c o rn o n - s p e c i f i ce x

13、p r e s s i o n i n s t o r a g et i s s u e ．T h e p u r p o s e i st op r o v i d et h ev e c t o r s f o rf u r t h e r t r a n s f o r m a t i o n t oo b t a i ns t a r c hm u t a n t s i np o t a t o ．T h i sr e s e

14、 a r c ha p p l i e dm o l e c u l a r b i o l o g ya n d g e n e t i ce n g i n e r r i n ga p p r e a c h s ：n I s o l a t e da n do b t a i n e dS S U e D N A t h r o u g hR T - P C R ；2 、C o n s t r u c t e dr e c o

15、m b i n a n tp l a s m i dc o n t a i n i n ga n t i s e o s eS S U c D N A ：a n d3 ) C o n s t m o t e dt w op l a n tt r a i l s f o r m a t i o nv e c t o r si nw h i c ht h eS S U e D N A W a Sd r i v e n b yp r o m

16、o t e rG B S S io rC a M V 3 5 S ，r e s p e c t i v e l y ．E x p r e s s i o no fa n t i s e n s eS S U e D N A i nE ．c o l i s t r a i nB L 2 1 ( D E 3 ) s h o w e dt h a tg l y c o g e nc o n t e n t sa n dt h ee v e n

17、 d e n s i t yo f s u b u n i ti n t h es t r a i nW e r es i g n i f i c a n t l yl o w e r t h a nt h ec o n t r 0 1 ．T h i si n d i c a t e dt h a t A G P a s ea c t i v i t ya n dg l y c o g e nb i o s y n t h e s i