羊鮑野生群體遺傳結(jié)構(gòu)及羊鮑與耳鮑Cytb基因序列比較研究.pdf

1、羊鮑有較高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，含多種維生素和微量元素。由于海區(qū)污染和過(guò)度捕撈，導(dǎo)致羊鮑資源受到嚴(yán)重破壞。本研究采用磁珠富集法，開(kāi)發(fā)了9對(duì)羊鮑高多態(tài)微衛(wèi)星引物，并應(yīng)用微衛(wèi)星分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)海南3個(gè)羊鮑群體進(jìn)行遺傳多樣性和遺傳分化研究，且分析了羊鮑和耳鮑線粒體Cytb基因片段序列的差異。以期為羊鮑種質(zhì)資源的良種選育、可持續(xù)利用和保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。
　　采用磁珠富集法，利用生物素標(biāo)記的(GT)15、(CT)15混合寡核苷酸探針從羊鮑的基因組

2、DNA的MboI酶切片段中篩選300～900bp的微衛(wèi)星序列。將洗脫的雜交片段克隆到pMD19-T載體上構(gòu)建富集微衛(wèi)星基因組文庫(kù)，通過(guò)PCR篩選檢測(cè)出陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序。挑取576個(gè)克隆檢測(cè)，取150個(gè)片段大小為500~1000bp克隆測(cè)序，從中設(shè)計(jì)了40對(duì)引物。以海南英州群體為研究對(duì)象，對(duì)引物進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，共檢測(cè)出12對(duì)多態(tài)引物，其等位基因數(shù)為2～5個(gè)，多態(tài)信息含量為0.153～0.637，觀察雜合度為0.0000～0.7857，期望

3、雜合度為0.0734～0.6019。多態(tài)性分析結(jié)果顯示，9對(duì)引物均具有較高的多態(tài)性，適合進(jìn)行群體遺傳學(xué)研究。
　　利用本實(shí)驗(yàn)所篩選的9對(duì)微衛(wèi)星引物，對(duì)我國(guó)海南3個(gè)羊鮑野生群體的遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，分析了各群體內(nèi)的遺傳多樣性和3個(gè)群體間的遺傳分化。羊鮑3個(gè)群體平均每位點(diǎn)等位基因數(shù)（A）介于2.7778～3.5556之間，平均為3.2593；平均每位點(diǎn)有效等位基因數(shù)（Ae）介于1.8662～2.0512之間，平均為1.9322；多態(tài)信息

4、含量（PIC）介于0.4596～0.5434之間，平均為0.4978；觀察雜合度在0.3650～0.4259之間，平均為0.3964；期望雜合度在0.4274～0.4779之間，平均為0.4480。群體間遺傳距離（D）介于0.0174～0.0256之間，遺傳分化系數(shù)（Fst）為0.0178，3個(gè)羊鮑群體間遺傳分化較小。微衛(wèi)星分子標(biāo)記技術(shù)分析結(jié)果認(rèn)為，我國(guó)海南羊鮑群體遺傳多樣性處于較低水平，野生羊鮑資源受到破壞，應(yīng)及時(shí)采取有效的保護(hù)措施，

5、以期為羊鮑種質(zhì)資源鑒定和保護(hù)和可持續(xù)發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。聚類分析顯示，英州群體與亞龍灣群體先聚為一類，再與安游群體聚為一類。
　　通過(guò)PCR擴(kuò)增、測(cè)序羊鮑和耳鮑的線粒體Cytb基因片段序列。結(jié)果表明，羊鮑3個(gè)群體間的Cytb片段堿基組成含量較為相似，A+T含量（平均為58.9％）也較為相似，高于G+C含量。羊鮑和耳鮑間堿基組成也較為相似。羊鮑3個(gè)群體間的遺傳距離為0.007～0.019。羊鮑與耳鮑間的遺傳距離為0.113。聚類分析顯