利用FOX hunting system技術(shù)篩選堿茅中與脅迫相關(guān)基因.pdf

1、堿茅(Puccinellia tenuifolra)是一種廣泛分布于我國東北部平原鹽堿地的多年生草本植物,屬于禾本科堿茅屬,其適應(yīng)性極強(qiáng),能在極其惡劣的鹽堿化土壤生長,甚至在堿斑周圍也能正常生長。對(duì)于堿茅這種特殊的野生耐鹽植物具有潛在的抗逆性相關(guān)基因資源,本研究是應(yīng)用了新型的功能基因選擇性篩選技術(shù)FOX hunting system首次通過模式生物酵母對(duì)其進(jìn)行研究。通過構(gòu)建堿茅全長cDNA基因文庫,連接到大腸桿菌-酵母穿梭型表達(dá)載體pA

2、UR101上,轉(zhuǎn)化到酵母菌株InVscI中,并對(duì)轉(zhuǎn)化得到的堿茅全長cDNA酵母文庫進(jìn)行了非生物脅迫的篩選和分析。根據(jù)研究目的選擇了對(duì)堿茅全長cDNA酵母文庫進(jìn)行耐NaCl鹽脅迫篩選,初步分析獲得的56個(gè)堿茅cDNA酵母菌株,確定主要研究其中的耐NaCl鹽脅迫性較強(qiáng)的堿茅cDNA酵母菌株15個(gè)。通過進(jìn)一步對(duì)這15個(gè)堿茅cDNA酵母菌株耐NaCl鹽脅迫、NaHCO3鹽脅迫和耐Mannitol干旱脅迫分析,發(fā)現(xiàn)在不同脅迫逆境和不同脅迫濃度梯度

3、下,獲得的15個(gè)堿茅cDNA酵母菌株都表現(xiàn)出一定的耐受性,生長狀況相互有差異,但均好于空載酵母菌株對(duì)照的生長狀態(tài)。
　　 克隆15個(gè)堿茅cDNA酵母菌株所攜帶的堿茅全長cDNA,獲得了其中10個(gè)。對(duì)這10個(gè)堿茅cDNA進(jìn)行測(cè)序,并與模式植物的已知基因的同源性做比對(duì),發(fā)現(xiàn)其中9個(gè)菌株所攜帶的基因均是新發(fā)現(xiàn)的基因,且基因功能未知。
　　 菌株Y011中攜帶的基因全長1162bp,包含的開放閱讀框架(ORF)長為756bp,編