利用cDNA-AFLP技術(shù)篩選與羊毛細(xì)度相關(guān)的分子標(biāo)記.pdf

1、羊毛細(xì)度的改良一直是細(xì)毛羊育種的重要目標(biāo)之一，新吉細(xì)毛羊是我國(guó)具有很好羊毛品質(zhì)的細(xì)毛羊，其主體為細(xì)型，部分個(gè)體達(dá)到了超細(xì)型，為了初步了解造成這種表型差異的遺傳本質(zhì)，進(jìn)而能篩選出超細(xì)型細(xì)毛羊的分子標(biāo)記，本研究利用AFLP技術(shù)對(duì)超細(xì)型細(xì)毛羊的基因組進(jìn)行檢測(cè)，利用cDNA-AFLP技術(shù)對(duì)羊毛細(xì)度極端個(gè)體(超細(xì)型和細(xì)型)皮膚組織的mRNA進(jìn)行了差異基因的比較分析，結(jié)果如下： 1.經(jīng)過(guò)大量摸索，建立了一套銀染-AFLP技術(shù)體系。采用Taq

2、 I和EcoR I雙酶切，利用6對(duì)引物對(duì)24只細(xì)毛羊基因組DNA進(jìn)行分析，共獲得226個(gè)AFLP標(biāo)記，平均一對(duì)引物獲得的標(biāo)記數(shù)在29～50之間，研究結(jié)果表明：AFLP技術(shù)適合檢測(cè)綿羊的遺傳多態(tài)性，新吉超細(xì)型細(xì)毛羊相似系數(shù)AFLP研究結(jié)果為0.914～0.982。 2.依據(jù)所建立的AFLP技術(shù)體系，共使用64對(duì)選擇性引物組合對(duì)羊毛細(xì)度極端個(gè)體皮膚組織的總RaNA進(jìn)行了差異顯示研究，檢測(cè)了近1200條cDNA帶，發(fā)現(xiàn)了21條差異片段

3、，其中16條在超細(xì)型細(xì)毛羊的表達(dá)量比細(xì)毛羊上高，其它在細(xì)毛羊上的表達(dá)量的比在超細(xì)型細(xì)毛羊上的高。成功克隆測(cè)序8條差異片段，得到的序列與GenBank中的序列進(jìn)行同源性比對(duì)后發(fā)現(xiàn)其中4個(gè)ESTs在GenBank中無(wú)同源性，其他的ESTs分別與羊的膜聯(lián)蛋白的mRNA(annexin 2)，牛的不均一核蛋白(heterogeneous nuclearribonucleoprotein H2)的mRNA，羊的BIIIB4高硫角蛋白的mRNA，牛