利用cDNA-AFLP技術(shù)分析全膜覆蓋對(duì)玉米苗期基因表達(dá)的影響.pdf

1、為了研究玉米苗期在全膜覆蓋條件下，基因的差異表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)利用cDNA-AFLP技術(shù)對(duì)全膜覆蓋條件下種植的玉米與不覆膜條件下種植的玉米，進(jìn)行差異表達(dá)基因片段的篩選、分離、測(cè)序和功能性分析，結(jié)果如下:
　　1.建立適合玉米苗期根系和葉片總RNA提取的方法，并將總RNA經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄形成雙鏈cDNA。使用PstⅠ和MseⅠ兩種內(nèi)切酶對(duì)雙鏈cDNA進(jìn)行酶切，設(shè)計(jì)與兩種內(nèi)切酶相對(duì)應(yīng)的接頭以及9對(duì)選擇性擴(kuò)增引物，進(jìn)行特異片段擴(kuò)增及測(cè)序。
　

2、　2.運(yùn)用cDNA-AFLP技術(shù)，共擴(kuò)增出條帶1481條，336條差異表達(dá)片段，約占總條帶數(shù)的22.7％。隨后將其中的60條進(jìn)行測(cè)序得到58條測(cè)序結(jié)果。
　　3.利用NCBI系統(tǒng)對(duì)58條測(cè)序結(jié)果進(jìn)行同源性分析和功能預(yù)測(cè)。結(jié)果如下:與植物同源性較高的有13條并且大多具有蛋白功能;與動(dòng)物同源性較高的有6條;與微生物同源性較高的有20條;另有，19條差異表達(dá)片段未能找到同源性序列。
　　4.獲得的與植物同源性較高的13條基因片段中