玉米雙低頻酶cDNA-AFLP體系的建立及穗數(shù)性狀相關(guān)基因的差異表達分析.pdf

1、cDNA—AFLP技術(shù)結(jié)合了AFLP和RT—PCR的優(yōu)點，無需了解序列信息便可顯示基因組表達序列的差異。該技術(shù)靈敏性高，重復(fù)性好，可對生物體轉(zhuǎn)錄組進行全面、系統(tǒng)的分析。但開展cDNA—AFLP研究，需要較高的費用。本研究建立了玉米雙低頻酶cDNA-AFLP技術(shù)體系，該體系經(jīng)濟有效；并將它用于玉米穗數(shù)性狀相關(guān)基因的差異表達研究，取得了良好的結(jié)果。其主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1.玉米雙低頻酶cDNA-AHLP體系的建立 以玉

2、米自交系QCL1094為材料，先用RNAisoReagent、柱式試劑盒法、異硫氰酸胍法等三種方法提取苗期葉片總RNA；然后，用PrimeSeriptTM1stStrandcDNASynthesisKit反轉(zhuǎn)錄獲得第一鏈eDNA，用RNaseH、E.coliDNA聚合酶I和E.coliDNA連接酶合成第二鏈cDNA，用T4DNA聚合酶進行末端平滑得到雙鏈cDNA；最后，用雙低頻酶EcogI和PstI酶切雙鏈cDNA，用T4DNA連接酶連

3、接接頭，用引物EA00和P00進行預(yù)擴增，用引物EA01和P01進行選擇性擴增。經(jīng)1％瓊脂糖凝膠和6％變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，結(jié)果表明本研究的RNA提取及cDNA-AFLP預(yù)擴增和選擇性擴增的效果良好。上述技術(shù)體系既經(jīng)濟又有效，可為cDNA-AFLP技術(shù)的應(yīng)用提供參考。 2.玉米穗數(shù)性狀相關(guān)基因的差異表達分析 用多穗玉米自交系QCL6004、雙穗玉米自交系QCL1010和單穗玉米自交系QCL1007、QCL1168、

4、QcL1178、AL29-2為親本材料，采用連續(xù)回交方法，構(gòu)建多穗玉米系的雙穗或單穗近等基因材料以及雙穗玉米系的單穗近等基因材料。取親本和近等基因材料的苗期葉片、穗分化時期葉片和生長點、吐絲期花絲、灌漿期籽實等作為實驗材料，采用上述技術(shù)體系，選取EA系列引物6條和P系列引物6條組成36對引物進行穗數(shù)性狀相關(guān)基因的差異表達分析。目前已經(jīng)找到6條差異片段，其中在BC3花絲時期，找到2條差異片段，在BC4苗期，找到4條差異片段。這些差異片段的