青花菜軟腐病病程的cDNA-AFLP差異表達分析.pdf

1、青花菜（Brassica oleracea L. Var. Italica）屬十字花科（Cruciferae）、蕓薹屬（Brassica）、甘藍種（Brassica species）。青花菜食用部分是其分化花蕾組成的花球及鮮嫩的花莖，不僅風味鮮美，營養(yǎng)也特別豐富，除含有較高的蛋白質及維生素外，還含有β胡蘿卜素、吲哚等有利于人體健康的微量元素和抗癌物質。軟腐病常發(fā)生在青花菜的生長、運輸、貯藏等過程，是十字花科蔬菜的主要病害之一，其致病菌為

2、歐文氏胡蘿卜亞種。本試驗用軟腐病病原菌接種青花菜葉片，在接種后0-7 h，每小時取一次樣，測定其生理指標。取第0 h、1 h、4 h、7 h的材料應用 cDNA-AFLP技術研究分析青花菜感病過程中差異表達基因，并利用RACE克隆技術克隆獲得LRR、WRKY兩條基因的cDNA。
　　1、開展了軟腐病病程相關的活性氧代謝研究。結果表明，隨著感病時間的推移，細胞膜透性、MDA含量呈現(xiàn)上升趨勢，SOD、POD呈現(xiàn)先降低后升高再降低的趨勢

3、， CAT酶活性變化不大，說明活性氧代謝在青花菜對軟腐病病源菌的響應中起到一定的作用。SOD、POD在低濃度時增強青花菜對病原菌的抗性，高濃度時降低青花菜對病原菌的抗性。
　　2、建立了青花菜cDNA-AFLP反應體系，20μL體系各個組分最佳用量為：模板用量為40 ng、引物用量為0.4μmol·μL-1、dNTP用量為0.2 mmol·L-1、Ex-Taq酶用量為0.5 U。
　　3、開展了青花菜感病過程中差異表達基因

4、cDNA-AFLP。應用了128對引物，最終獲得了102條TDFs，測序成功91個，將這些序列在VecScreen中去載體，在NCBI里進行Blast，比對結果顯示：同源性較低的序列5個，來源物種為細菌的序列5個，來源為動物序列的1個，最后得到80個同源性較高的差異片段基因。根據(jù)功能的不同，初步將其分為8類：信號轉導相關基因、抗病相關基因、生物合成關鍵酶基因、蛋白質合成與修飾相關基因、逆境響應相關基因、代謝途徑相關酶類基因、轉錄因子以及

5、一些其它未知功能的基因。
　　4、克隆了LRR、WRKY的cDNA。其中LRR基因cDNA全長1235 bp，開放閱讀框共有903個堿基組成，編碼301個氨基酸，在GenBank上登錄號為：KC476519，該基因屬于R基因，通過對其蛋白結構的預測推測其具為TM結構域、胞外LRR結構域和絲/蘇氨酸激酶位點。WRKY基因 cDNA全長為1710 bp，開放閱讀框共有1500個堿基組成，編碼500個氨基酸，在GenBank上登錄號為：