基于cDNA-AFLP分析茶樹噴施化學(xué)殺蟲劑前后的基因表達(dá)譜差異.pdf

1、化學(xué)防治是茶園管理中不可或缺的手段之一，但是在人們受益的同時(shí)，其對(duì)茶樹體內(nèi)的生理生化反應(yīng)和自身對(duì)病、蟲害防御體系是否產(chǎn)生負(fù)面影響值得關(guān)注。論文基于cDNA-AFLP技術(shù)，研究茶樹被噴施目前茶園常用化學(xué)殺蟲劑吡蟲啉前后的基因表達(dá)譜差異，并對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析和qRT-PCR驗(yàn)證。主要結(jié)果如下：
　　 (1)利用內(nèi)切酶分析軟件，對(duì)GenBank中登錄的有關(guān)茶樹基因的cDNA全長(zhǎng)序列和EST進(jìn)行酶切分析，結(jié)果表明ApoI/

2、MseI是利用cDNA-AFLP技術(shù)對(duì)茶樹進(jìn)行差異表達(dá)譜分析的最佳酶切組合。
　　 (2)以優(yōu)化后的cDNA-AFLP技術(shù)分析茶樹噴施吡蟲啉（出廠推薦使用濃度）前后的基因表達(dá)譜差異，結(jié)果總共獲得了220條差異表達(dá)片段(TDF)，經(jīng)回收、克隆和測(cè)序得到160條，其中誘導(dǎo)表達(dá)的有94條，抑制下調(diào)的有66條。差異條帶長(zhǎng)度總體分布在113-822 bp之間，其中大部分條帶長(zhǎng)度集中在200-300bp和300-400 bp之間，分別占總數(shù)

3、的3g％與30％，而且還有一些片段長(zhǎng)度大于500 bp。
　　 (3)利用BLAST進(jìn)行同源性比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，160條TDF中有8條的比對(duì)結(jié)果出現(xiàn)重復(fù)，余下的152條中有26條功能尚不清楚，18條為沒(méi)有參比序列相匹配的新序列；對(duì)剩下的108個(gè)與已知功能基因相關(guān)的TDF序列進(jìn)行功能預(yù)測(cè)，結(jié)果表明這些條帶可以分別歸屬于信號(hào)傳導(dǎo)、光合與能量代謝、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、抗病與抗逆蛋白、跨膜運(yùn)輸、應(yīng)激反應(yīng)和物質(zhì)代謝等7個(gè)功能類型。其中，對(duì)于誘導(dǎo)上調(diào)和抑

4、制下調(diào)的TDF來(lái)說(shuō)，其分屬的功能類型共同特點(diǎn)是二者中與光合與能量代謝，以及物質(zhì)代謝相關(guān)的基因所占比例最高，分別占各自總數(shù)的41％與36％;而二者間不同之處是，前者與轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能相關(guān)的基因所占比例明顯少于后者，分別占各自總數(shù)的9％和16％;二者與其它功能類型的基因所占各自總數(shù)的比例差別不大。
　　 (4)為了驗(yàn)證差異條帶的正確性和吡蟲啉對(duì)茶樹基因表達(dá)影響特點(diǎn)，分別選擇了2條誘導(dǎo)上調(diào)TDF(17N3、26P5)和4條抑制下調(diào)TDF(