cDNA-AFLP技術分離桂花香氣相關基因.pdf

1、桂花(Osmanthus Fragrans)是木犀科木犀屬的代表種，是優(yōu)良的園林綠化樹種和香花樹種。 本研究以桂花的花蕾為材料，運用cDNA-AFLP技術，分離桂花花香形成過程中差異片段，通過克隆測序，BLAST分析，獲得的6個可能與香味相關的基因片段，為下一步揭示桂花香味物質代謝途徑奠定基礎，希望為花卉香味的遺傳改良提供一條新途徑，主要試驗結果如下： 1建立適合桂花花蕾總RNA的提取技術體系 采用改良熱硼酸法，

2、改良 Tris-硼酸法，試劑盒提取桂花花蕾總RNA，比較結果顯示試劑盒法提取的總KNA，條帶完整，質量好，純度高，適合開展試驗。 2利用cDNA-AFLP技術分離桂花花香形成過程中差異基因 采用末端兩個選擇性堿基的16條EcoRⅠ引物和16條MseⅠ進行選擇性擴增，共256對引物組，通過篩選，確定160對引物組進行擴增。試驗共回收差異條帶100帶，獲得50條測序結果。在NCBI數據庫中進行BLAST比對，發(fā)現有31條序列

3、在nr庫中搜索到相似性較高的基因。另外17條序列沒有搜索到同源序列，推測為未知基因。分析顯示31個TDFs中6個TDFs可能與植物香氣成分相關，分別命名為20Gox2，C4H1，CCD4，AACT，CFAT，LOX。 3采用RT-PCR技術分離CFAT和LOX的3'端序列 選取其中兩個可能與桂花香氣相關基因片段CFAT和LOX，設計引物，采用RT-PCR技術擴增其3'端序列，分別進行克隆、測序和拼接，獲得了CFAT3'末