母豬日糧蛋白水平對仔豬脂肪沉積的影響及l(fā)eptin介導(dǎo)的脂肪代謝調(diào)控研究.pdf

1、本試驗(yàn)旨在探索母豬日糧蛋白水平對仔豬斷奶時(shí)脂肪沉積的影響以及Leptin對豬原代脂肪細(xì)胞的影響及機(jī)制。試驗(yàn)主要通過對脂滴包被蛋白（Perilipin）、脂肪分解酶和其他相關(guān)指標(biāo)的檢測來研究脂代謝的變化情況。
　　 1母豬日糧蛋白水平對斷奶仔豬脂肪沉積的影響
　　 根據(jù)母豬日糧蛋白水平，試驗(yàn)分為對照組（妊娠期和哺乳期母豬日糧蛋白水平分別為12％和14％）和試驗(yàn)組（妊娠期和哺乳期母豬日糧蛋白水平分別為6％和7％），其后代仔豬

2、斷奶時(shí)采樣。采樣前測量仔豬體重及背膘厚度，采用放射免疫分析法測定背脂中Leptin激素水平，用相對定量實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測仔豬脂肪組織中Leptin、LepR、HSL、ATGL、FAS mRNA表達(dá)，用免疫印跡（WesternBlot）方法對Perilipin及其磷酸化蛋白進(jìn)行定量，測定了脂肪分解酶（包括HSL和ATGL）的活力。結(jié)果顯示：試驗(yàn)組仔豬體重及背膘厚度均低于對照組，背脂中Leptin激素水平也呈下降趨勢。低蛋白組Lepti

3、n、ATGL、FAS的mRNA水平均降低，LepR、HSL沒有變化。Perilipin總蛋白水平在組間沒有差異，但是試驗(yàn)組的Perlipin磷酸化水平呈現(xiàn)上升的趨勢。試驗(yàn)組的脂肪分解酶的活力顯著高于對照組。以上結(jié)果提示：母體日糧蛋白限飼對后代仔豬脂肪沉積的影響不僅降低了其脂肪合成能力，更主要是通過脂肪分解能力的提高來減少了脂肪沉積。
　　 2 Leptin對豬原代脂肪細(xì)胞的影響及其機(jī)制
　　 由斷奶仔豬皮下脂肪分離血管基

4、質(zhì)細(xì)胞，增殖培養(yǎng)至80％融合，分化3天后，用10-8M、10-7M兩個(gè)濃度分別進(jìn)行短時(shí)（4h）和長時(shí)（48h）處理。用油紅 O染色法和免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法鑒定脂肪細(xì)胞、脂滴及脂滴包被蛋白，MTT方法檢測細(xì)胞活力；用試劑盒測定培養(yǎng)液中甘油釋放量，用相對定量實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測細(xì)胞Perilipin、HSL和ATGL mRNA表達(dá)，免疫印跡（Western Blot）方法對Perlipin及其磷酸化蛋白進(jìn)行定量，測定了脂肪分解酶（包括HS

5、L和ATGL）的活力。結(jié)果顯示，4h短時(shí)處理后，10-7M Leptin顯著增加細(xì)胞活力，10-8M處理組沒有變化；兩個(gè)處理濃度組均顯著促進(jìn)細(xì)胞甘油釋放量，但對脂肪分解酶的活性沒有顯著影響；10-7 M Leptin處理組Perilipin、HSL、ATGL的mRNA表達(dá)均顯著上調(diào)，10-8M Leptin只對ATGL的表達(dá)有促進(jìn)作用；兩個(gè)濃度處理組的Perilipin總蛋白表達(dá)量均沒有顯著變化，并且未檢測到其磷酸化水平。48h長時(shí)處理

6、后，10-7 M Leptin顯著增加細(xì)胞活力，10-8M處理組沒有變化；兩個(gè)處理濃度組均顯著促進(jìn)細(xì)胞甘油釋放量；10-8 M Leptin濃度組Perilipin mRNA表達(dá)顯著下調(diào)，10-7 M Leptin顯著上調(diào)ATGL的mRNA表達(dá)；Perilipin總蛋白含量僅在10-7 M實(shí)驗(yàn)組表達(dá)呈下降的趨勢，而磷酸化Perilipin蛋白的含量在兩個(gè)濃度處理組均顯著上調(diào)。以上結(jié)果表明Leptin處理豬原代成熟脂肪細(xì)胞顯著增加了脂肪細(xì)