蛇莓的組織培養(yǎng)及玻璃化法超低溫保存離體莖尖.pdf

1、本研究以寶天曼野生蛇莓(Duchesneae Indicae)莖尖為外植體，建立了蛇莓的組織培養(yǎng)和快速繁殖體系。另外，對(duì)蛇莓離體莖尖的玻璃化法超低溫保存過(guò)程進(jìn)行了初步研究。為蛇莓的進(jìn)一步研究提供了科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 (1)最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2.0mg·L-16-BA，誘導(dǎo)分芽率為100％，平均分化系數(shù)為19.87±1.51；最佳增殖培養(yǎng)基為MS+2.0mg·L-16-BA+0.01mg·L-1IBA，平均增值

2、系數(shù)為9.47±1.51；生根培養(yǎng)基使用MS，并且不添加任何激素時(shí)效果比較理想，平均根長(zhǎng)和平均生根數(shù)分別為(4.15±0.92)cm和(6.73±1.58)條。
　　 (2)以玻璃化法進(jìn)行蛇莓離體莖尖的超低溫保存初步研究。研究了低溫鍛煉時(shí)間、預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、預(yù)處理時(shí)間、PVS2處理時(shí)間、液氮保存時(shí)間對(duì)蛇莓離體莖尖超低溫保存后存活率的影響。結(jié)果表明，切取繼代30d，4℃低溫鍛煉3～4周生長(zhǎng)健壯的蛇莓莖尖1～2mm，在固體預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基(

3、solidpre-culturemedium，SPCM：MS+184.2g·L-1甘油+136.9g·L-1蔗糖+7g·L-1瓊脂)中室溫下培養(yǎng)4d后，轉(zhuǎn)入無(wú)菌冷凍管。向冷凍管中加入液體預(yù)處理培養(yǎng)基(liquidpretreatmentmedium，LPTM：MS+184.2g·L-1甘油+136.9g·L-1蔗糖)，于20℃處理20～30min；用植物玻璃化溶液2(plantvitrificationsolution2，PVS2：MS

4、+300g·L-1甘油+150g·L-1乙二醇+150g·L-1DMSO+136.9g·L-1蔗糖)取代液體預(yù)處理培養(yǎng)基，于0℃處理50～70min后，換成新鮮PVS2，快速投入液氮中保存1h，于40℃水中快速解凍1min，洗液洗滌3次，每次10min，取出莖尖，接種到再生培養(yǎng)基(regenerationmedium，RM:MS+1.0mg·L-1GA3+1.0mg·L-16-BA+30g·L-1蔗糖+7g·L-1瓊脂)。暗培養(yǎng)4d后，