白樺不同花期雌花發(fā)育相關(guān)基因的篩選及表達(dá)研究.pdf

1、通過(guò)解剖觀察及生物制片技術(shù)確定白樺雌花發(fā)育的各個(gè)時(shí)期,以白樺雌花序?yàn)樵囼?yàn)材料,構(gòu)建了白樺花期的正反向消減文庫(kù)。從消減文庫(kù)中篩選特異基因并進(jìn)行初步的生物信息學(xué)分析。同時(shí)在兩個(gè)文庫(kù)中選出4個(gè)特異基因,通過(guò)做實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)這4個(gè)基因在不同時(shí)期的雌花序,雄花序和葉中的表達(dá)情況,并進(jìn)行基因功能的初步分析。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.確定了白樺雌花序在不同時(shí)期的發(fā)育情況,根據(jù)胚胎學(xué)發(fā)育特征,確定4月30日至5月11日為受粉、胚珠珠心、

2、珠被分化及大孢子發(fā)生時(shí)期,確定5月12日至25日為雌配子體形成和受精時(shí)期,以這兩段時(shí)期雌花序的cDNA互為tester和driver構(gòu)建消減文庫(kù)BHHQ和BHHZ。
　　 2.在BHHQ消減文庫(kù)中篩選到480個(gè)特異基因,文庫(kù)的冗余度為30.64％,在反向的BHHZ消減文庫(kù)中篩選到503個(gè)特異基因,文庫(kù)冗余度為29.55％。與數(shù)據(jù)庫(kù)中已經(jīng)登錄的基因進(jìn)行blastn和blastx比對(duì),分析表明BHHQ和BHHZ庫(kù)中分別有357個(gè)特異

3、基因(74.38％)和431個(gè)特異基因(85.69％)與已知數(shù)據(jù)庫(kù)中的核酸或蛋白序列具有同源性(Blastn E-Value＜e-10,Blastx E-Value＜e-5),其余的分別為103個(gè)和57個(gè)特異基因與己知序列無(wú)同源性或同源性較低,可以視作新基因。在BHHQ中篩選到與花發(fā)育相關(guān)的序列中包括WD-重復(fù)蛋白、核苷二磷酸激酶、組蛋白H4、質(zhì)膜H+-ATPase等基因;在BHHZ中篩選到與花發(fā)育相關(guān)的序列包括開(kāi)花位點(diǎn)T、鋅指蛋白、抗