擬南芥CBF3基因轉(zhuǎn)化巴西橡膠樹的研究.pdf

1、本研究以巴西橡膠熱研7-33-97為實驗材料,以調(diào)控植物抗寒性的CBF3基因為目的基因,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法分別轉(zhuǎn)化熱研7-33-97花藥愈傷組織進(jìn)行巴西橡膠樹的轉(zhuǎn)基因研究.
　　 通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法,研究選擇轉(zhuǎn)化材料、侵染后共培養(yǎng)時間、共培養(yǎng)溫度、抑菌抗生素濃度等對遺傳轉(zhuǎn)化的影響。結(jié)果表明:選擇培養(yǎng)30天的花藥愈傷組織,侵染3min后,在20℃共培養(yǎng)2d,再轉(zhuǎn)至添加200mg/L Cef的培養(yǎng)基上,可有效的控制農(nóng)桿菌污

2、染,并且愈傷組織在侵染后可繼續(xù)生長.但是由于橡膠花藥愈傷組織本身的成胚率十分低,加之農(nóng)桿菌的侵染以及添加Cef,對愈傷組織的損傷較大,愈傷組織很難形成正常的胚狀體.
　　 研究了基因槍法轉(zhuǎn)化熱研7-33-97花藥愈傷組織,并通過25mg/Lhyg的篩選,最終獲得3株抗性苗。經(jīng)過提取其葉片DNA進(jìn)行PCR檢測,其中一株呈陽性。該株轉(zhuǎn)化苗經(jīng)過擴(kuò)繁4代后得到29株苗,再次提取葉片DNA進(jìn)行PCR檢測,結(jié)果仍然呈陽性,初步證明CBF3基