抗寒相關基因CBF3、ICE1以及AtGolS3的轉基因擬南芥耐寒效果評價.pdf

1、低溫冷害使許多植物生存受到嚴重危害，全球每年因低溫冷害造成的農(nóng)作物損失高達數(shù)千億元，提高植物抗寒能力的研究具有重要的理論意義和現(xiàn)實意義。本研究采用PCR方法從擬南芥(Arabidopsisthaliana)中分離受低溫誘導的CBF3(C-repeatBindingFactor3)、ICE1(InducerofCBFExpression1)、AtGolS3(ArabidopsisGalactinolsynthase3)三種抗寒相關基因和C

2、BF3冷誘導啟動子CP。將CP-CBF3置于植物表達載體pCAMBIA1300中，構建CBF3基因冷誘導表達載體pCA-CP-CBF3；然后將帶有組成型啟動子的肌醇半乳糖苷酶基因AtGloS3和抗寒基因ICE1分別合并于pCA-CP-CBF3中，構建了兩個雙基因植物表達載體pCA-CP-CBF3-35S-AtGolS3和pCA-CP-CBF3-35S-ICE1，其中CBF基因冷誘導表達，AtGolS3和ICE1基因過量表達。以上三種重組

3、質(zhì)粒轉入農(nóng)桿菌GV3101中，并利用真空抽濾法導入擬南芥中，經(jīng)50mg/L的潮霉素(Hyg)抗性篩選，得到T4代單拷貝插入純合子植株。 將野生型擬南芥與耐寒基因轉基因擬南芥純合子從RT-PCR、葉綠素含量、相對電導率和脯氨酸含量等四個抗寒性生理生化指標進行抗寒性評價。實驗結果表明，單基因pVKH-35S-AtGolS3轉擬南芥和聯(lián)合雙基因pVKH-35S-CBF3-35S-AtGolS3轉化擬南芥的抗寒能力均比野生型擬南芥強；而