海島棉組培過(guò)程細(xì)胞形態(tài)特性與基因表達(dá)差異的研究.pdf

1、海島棉組織培養(yǎng)過(guò)程的研究對(duì)于促進(jìn)長(zhǎng)絨棉分子育種改良工程具有極其重要的意義，目前已有一些關(guān)于陸地棉組織培養(yǎng)過(guò)程中形態(tài)變化和分子機(jī)理的研究報(bào)道，但是對(duì)于海島棉組織培養(yǎng)過(guò)程的細(xì)胞形態(tài)變化和分子機(jī)制研究寥寥無(wú)幾。本研究以海島棉新海16為材料，選取胚性愈傷組織初期，胚性愈傷組織后期，體細(xì)胞胚形態(tài)建成初期的愈傷組織和對(duì)照無(wú)菌苗葉片進(jìn)行石蠟切片觀察和基因組DNA提取，初步說(shuō)明了體胚中出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，接著用DDRT-PCR方法尋找胚性愈傷初期的差異表

2、達(dá)基因，為今后長(zhǎng)絨棉分子育種改良奠定一定分子和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。本研究取得的主要結(jié)果如下：
　　 1．選取胚性愈傷組織初期、后期及體細(xì)胞胚初期的愈傷組織和對(duì)照無(wú)菌苗葉片進(jìn)行石蠟切片觀察，發(fā)現(xiàn)體細(xì)胞胚初期的細(xì)胞形態(tài)與對(duì)照無(wú)菌苗幼葉相似，并且通過(guò)測(cè)微尺測(cè)量細(xì)胞壁厚度發(fā)現(xiàn)，兩者細(xì)胞壁厚度相差不大。而在胚性愈傷初期細(xì)胞略微變大，細(xì)胞與細(xì)胞間聯(lián)系緊密，到了胚性愈傷后期形成獨(dú)立的細(xì)胞團(tuán)結(jié)構(gòu)。
　　 2．提取胚性愈傷組織初期，胚性愈傷組織后

3、期，體細(xì)胞胚形態(tài)建成初期的愈傷組織和對(duì)照無(wú)菌苗葉片組織的DNA經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胚性愈傷組織后期基因組DNA形成了明顯梯狀條帶。證實(shí)了胚性愈傷組織再分化形成體細(xì)胞胚要經(jīng)歷細(xì)胞凋亡的階段。
　　 3．分別提取胚性愈傷組織和對(duì)照無(wú)菌幼苗下胚軸的總RNA，進(jìn)行DDRT-PCR，在胚性愈傷組織中獲得重復(fù)性高的條帶12條。將這12條差異帶與pMDTM18-T Vector連接，轉(zhuǎn)化到DH5a菌株進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，測(cè)序，最后得到胚性