海島棉遺傳轉(zhuǎn)化體系及轉(zhuǎn)NAC6基因的研究.pdf

1、本研究通過(guò)誘導(dǎo)不同基因型海島棉下胚軸的體細(xì)胞胚胎發(fā)生,以新海16號(hào)、新海24號(hào)、新海30號(hào)胚性愈傷組織為受體材料,進(jìn)一步優(yōu)化海島棉遺傳轉(zhuǎn)化體系,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化NAC轉(zhuǎn)錄子家族,獲得轉(zhuǎn)基因再生植株T0代,使用PEG6000(簡(jiǎn)稱PEG)對(duì)棉花的體細(xì)胞胚胎進(jìn)行滲透脅迫,研究體細(xì)胞胚胎對(duì)不同濃度PEG脅迫的敏感性,研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　利用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建立的棉花再生體系,同時(shí)以陸地棉為基礎(chǔ)比較海島棉再生植株和非再生植株在誘導(dǎo)愈

2、傷組織時(shí)期、愈傷組織分化時(shí)期、體細(xì)胞胚胎時(shí)期的出愈數(shù)量、出愈時(shí)間,進(jìn)一步確定再生植株比非再生植株在體細(xì)胞發(fā)生方面的優(yōu)越性。結(jié)果表明再生植株比非再生植株在各個(gè)時(shí)期的時(shí)間縮短了30d左右。
　　以3個(gè)栽培海島棉品種新海30、新海24、新海16誘導(dǎo)而來(lái)的胚性愈傷組織為受體材料,采用方差分析的方法研究不同菌種和質(zhì)粒對(duì)本實(shí)驗(yàn)室已建立的農(nóng)桿菌介導(dǎo)海島棉外源基因轉(zhuǎn)化體系的影響。研究結(jié)果表明:菌種和質(zhì)粒對(duì)轉(zhuǎn)化率有極其顯著的影響,而兩者之間的互作關(guān)

3、系也比較顯著。最終得到農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化海島棉胚性愈傷組織的最佳菌種和質(zhì)粒是:GV3101和pBI121。本研究結(jié)果將有助于改進(jìn)和完善海島棉胚性愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　通過(guò)PEG6000脅迫胚性愈傷組織,研究不同濃度PEG6000脅迫下胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率,得出耐旱水平變化情況,通過(guò)測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)等的活性來(lái)鑒定轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因海島棉的耐旱性。結(jié)果表明:PEG6000的濃度為10％時(shí),轉(zhuǎn)NAC6基