狐源犬瘟熱病毒分離鑒定與幼狐抗犬瘟熱病毒母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律測(cè)定.pdf

1、本研究采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，用MDCK細(xì)胞從疑似犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus，CDV)CDV感染的狐貍病料中進(jìn)行CDV的分離鑒定，并且對(duì)幼狐抗CDV的母源中和抗體的消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行了測(cè)定。 1．狐貍CDV的分離鑒定 采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)泰安地區(qū)養(yǎng)殖戶送檢的9份疑似CDV感染的狐貍病料進(jìn)行CDV的分離鑒定。對(duì)送檢病料進(jìn)行常規(guī)處理，用D-MEM細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液制成1：9懸液，混勻，4000rpm離心25

2、 min，取上清，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾除菌，然后接種MDCK細(xì)胞。對(duì)接種病料的MDCK細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)傳代培養(yǎng)，其中一份病料接種的MDCK細(xì)胞傳至第5代，出現(xiàn)CDV樣細(xì)胞病變(CPE)；若傳至第5代未出現(xiàn)CPE，則視為分離陰性。對(duì)所分離到的病毒進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、病毒核酸型鑒定、耐熱性試驗(yàn)、耐酸性試驗(yàn)、脂溶劑敏感試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)及RT-PCR等病毒學(xué)鑒定，并用所分離病毒對(duì)50-60日齡的CDV易感幼狐進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)。結(jié)果，電鏡下觀察所分離病

3、毒為CDV樣病毒粒子，核酸類型為RNA病毒，不耐熱、不耐高溫、對(duì)脂溶劑敏感，抗CDV抗體能夠特異性的抑制CDV在MDCK細(xì)胞內(nèi)的增殖，用N基因的特異性引物能夠擴(kuò)增出CDV特異性N基因核酸片段，所分離病毒能夠感染狐貍引起犬瘟熱(Canine Distemper，CD)癥狀。結(jié)果證明，所分離病毒為CDV，命名為CDV-TA-FOX，這是國內(nèi)首次從狐貍體內(nèi)分離到CDV，為進(jìn)一步研究狐貍CDV的分子生物學(xué)特征及研制狐貍專用的CD弱毒疫苗提供了物

4、質(zhì)基礎(chǔ)。 2．幼狐抗CDV母源中和抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定 母源抗體的被動(dòng)免疫對(duì)新生動(dòng)物是十分重要的，然而對(duì)疫苗的接種也帶來一定的影響，若免疫接種時(shí)間過早，母源抗體的干擾易造成CD免疫失敗，嚴(yán)重影響免疫效果，若免疫接種時(shí)間過晚，則動(dòng)物易出現(xiàn)CD免疫空白期，動(dòng)物易于感染CDV。為此，我們對(duì)幼狐抗CDV母源中和抗體的消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行了測(cè)定。在泰安郊區(qū)5個(gè)狐貍場(chǎng)，隨即抽取20只未進(jìn)行免疫接種的健康幼狐，分別在30日齡、45日齡、60日齡

5、進(jìn)行頸靜脈采血，制備血清，-20℃凍存，待檢。采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，在96孔微量細(xì)胞培養(yǎng)板上，對(duì)待檢血清進(jìn)行抗CDV中和抗體鑒定。結(jié)果，絕大多數(shù)幼狐在30日齡母源抗體較高，如此時(shí)對(duì)幼狐進(jìn)行CD免疫，易造成免疫失??；幼狐在45日齡母源抗體均較低，血清中和抗體效價(jià)均等于或小于1：18.6，此時(shí)進(jìn)行免疫能夠獲得成功；幼狐在60日齡母源抗體基本消失，均小于1：8.0，若此時(shí)進(jìn)行免疫能獲得良好的免疫效果，但是在60日齡前會(huì)有一段免疫空白期，在此期