犬瘟熱病毒CDV-1株的分離鑒定、毒力及免疫原性的研究.pdf

1、本研究對來自臨床疑似患犬瘟熱狗的組織病料進(jìn)行病毒分離，在Vero細(xì)胞上分離得到一株病毒，定名為CDV-1。經(jīng)傳代后，出現(xiàn)穩(wěn)定的細(xì)胞病變，以細(xì)胞聚集、圓縮和拉網(wǎng)脫落為特征。 通過電鏡觀察可見，CDV-1病毒粒子主要呈球形，大小為150nm左右，在細(xì)胞中分布于細(xì)胞漿。在理化試驗中，CDV-156℃30min被滅活，pH7.0-8.0病毒活性不受影響，pH6.0以下和pH9.0以上病毒活力受到影響。CDV-1有囊膜，不凝集雞、兔和綿羊

2、紅細(xì)胞。該病毒接種Vero細(xì)胞5dTCID50為10-2.13/ml，7dTCID50為10-4.81/ml，9dTCID50為10-5.35/ml，10dTCID50可達(dá)10-5.832/ml。中和試驗顯示，陽性血清能中和CDV-1吸附細(xì)胞，其中和效價為1:13。 在動物試驗中，選擇腹腔注射1×105.8TCID501ml，3×105.8TCID501ml和6×105.8TCID501ml3個梯度的CDV-1活病毒粒子，其中接

3、毒量為6×105.8tCID501mlCDV-1的試驗犬成功地復(fù)制出了典型的犬瘟熱臨床癥狀。該組試驗犬于攻毒后第4-7d出現(xiàn)食欲廢絕、鼻卡他、腹瀉、眼角有膿性分泌物，體溫呈典型的雙相熱，最終機(jī)體極度衰竭死亡。剖解可見肺尖出血，肝臟腫大、質(zhì)地變脆，淋巴結(jié)腫大，腹腔有積液，腸系膜充血脫落和脾臟邊緣出血梗死。刮取膀胱粘膜上皮細(xì)胞進(jìn)行蘇木素-伊紅染色(HE染色)，可見細(xì)胞質(zhì)中有紅色包涵體顆粒。病理切片觀察可見肝臟充血、肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性，肺泡壁

4、增厚，氣管中有炎性細(xì)胞聚集，脾臟中出現(xiàn)大量嗜銀染顆粒，白髓區(qū)淋巴細(xì)胞減少。接種量為3×105.8TCID501ml的2只犬均出現(xiàn)食欲不振、精神沉郁，于攻毒后7d出現(xiàn)輕微的體溫升高，但未出現(xiàn)死亡。接種量為1×105.8TCID501ml的2只犬臨床癥狀不明顯，而未接種病毒的對照犬，未出現(xiàn)任何臨床癥狀。 本研究對比了CDV-1活毒抗原和滅活抗原的免疫原性。將5×103.8TCID50/ml和5×102.8TCID50/ml的活毒抗原

5、和1×105.8TCID50/ml的滅活病毒抗原分別接種健康幼犬，活毒抗原僅免疫1次(1ml/次)，滅活抗原免疫2次(2ml/次)，于接種后28d經(jīng)腹腔攻毒，攻毒劑量為5×105.8TCID50/1ml1ml。采集免疫后5d、10d、20d和27d以及攻毒后7d和12d的血清，經(jīng)間接ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，活毒抗原誘導(dǎo)的抗體水平低于滅活抗原(0.01＜P＜0.05)。接種5×103.8TCID50/ml的活毒抗原誘導(dǎo)的抗體水平僅略高于接種5