產(chǎn)嗜殺因子海洋酵母多樣性的初步研究.pdf

1、本論文以梭子蟹的“乳化病”的病原酵母菌梅奇酵母(Metschnikowia bicuspidata) WCY為敏感菌，涂布篩選培養(yǎng)基，把目標(biāo)酵母菌點(diǎn)種在平板上，培養(yǎng)后，觀察有無(wú)抑菌圈來(lái)篩選嗜殺酵母。
　　 以本實(shí)驗(yàn)室收藏的部分海洋酵母菌為目標(biāo)菌，以上述方法從300株中選出5株產(chǎn)嗜殺因子的海洋酵母菌，分別是2E00688，2E00797，2E00814，2E00871，2E01035。將這5株酵母菌接種YPD培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)28℃培養(yǎng)

2、后，進(jìn)行菌落形態(tài)、菌體形態(tài)的鑒定；經(jīng)過(guò)碳源發(fā)酵和同化實(shí)驗(yàn)等生理生化鑒定；由11株（種）相近屬酵母菌與一種親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的Debaryomyces hansenii的26S rDNA基因序列對(duì)比產(chǎn)生26S rDNA的基因序列聚類分析結(jié)果系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，發(fā)現(xiàn)這5株酵母菌的26S rDNA基因序列分別與克魯維酵母(Kluyveromyces aestuarii)，木拉克酵母屬酵母(Mrakia frigida)，解脂耶羅威亞酵母(Yarrowia

3、lipolytica)，克魯維酵母(Kluyveromycessiamensis)，乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)的基因序列相似性最高。這5株酵母菌在GenBank中26S rDNA序列登錄號(hào)分別是EU651844，EU680778, EU596441, FJ483911和FJ437050。
　　 將篩選出的5株酵母菌分類鑒定以后，進(jìn)行殺菌譜實(shí)驗(yàn)。以待檢敏感酵母菌涂布篩選培養(yǎng)基平板，將5株嗜殺酵母菌點(diǎn)

4、種于平板上，培養(yǎng)后，觀察抑菌圈，作出這5株嗜殺酵母菌的殺菌譜。敏感酵母菌使用本實(shí)驗(yàn)室收藏的梅奇酵母(M.bicuspidata)WCY,熱帶假絲酵母（Candida tropicalis），釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae），粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe），絲孢酵母（Trichosporonmontevideense），解脂耶羅威亞酵母（Yarrowialipolytica），

5、白假絲酵母（Candida albicans），淺白隱球酵母（Cryptococcusaureus）。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這5株菌對(duì)敏感菌的抑菌效果如下：這5株菌對(duì)梅奇酵母(M. bicuspidata) WCY都有嗜殺作用，乳酸克魯維酵母(K. lactis)對(duì)白假絲酵母(Candida albicans)有嗜殺作用，克魯維酵母（K. aestuarii）對(duì)粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe），木拉克酵母屬酵母