異常畢赤酵母(Pichia anomala) HN1-2菌株產(chǎn)單細(xì)胞蛋白和嗜殺因子的研究.pdf

1、紅樹林生態(tài)系統(tǒng)分布在全球112個(gè)國(guó)家，總面積達(dá)到181000 Km2，覆蓋了世界熱帶和亞熱帶60％～75％的海岸線。中國(guó)現(xiàn)存的紅樹林約占世界紅樹林面積的0.1％。紅樹林中含有豐富的微生物資源，其中已分離鑒定出的真菌超過100種，成為海洋真菌的第二大類群。本論文從紅樹林生態(tài)系統(tǒng)中分離得到一株同時(shí)產(chǎn)單細(xì)胞蛋白和嗜殺因子的酵母菌株HN1-2，通過傳統(tǒng)方法和分子生物學(xué)方法的鑒定，該菌株屬于異常畢赤酵母，這是該現(xiàn)象的首次報(bào)道。
　　 本論

2、文以廉價(jià)的豆餅粉水解液為基礎(chǔ)，通過單因子優(yōu)化的方法，對(duì)異常畢赤酵母HN1-2菌株液體發(fā)酵同時(shí)產(chǎn)單細(xì)胞蛋白和嗜殺因子的條件進(jìn)行了優(yōu)化。最終確定最佳培養(yǎng)基組成(w/v)為：4.0％豆餅粉水解液，3.0％葡萄糖。最佳起始pH4.0，最佳接種量(v/v)為8.0％(OD600nm=8.3)，最佳培養(yǎng)溫度28℃。在5-L發(fā)酵罐中發(fā)酵時(shí)，該嗜殺菌株在12 h內(nèi)即可產(chǎn)生大量的單細(xì)胞蛋白和嗜殺因子。此時(shí)，菌體細(xì)胞的蛋白含量、生物量、還原糖含量以及透明圈

3、直徑分別達(dá)到56.0％(w/w)，7.3 g/L，9.5 g/L和19.0 mm。對(duì)發(fā)酵后菌體細(xì)胞的氨基酸組成進(jìn)行分析的結(jié)果顯示，菌體細(xì)胞中含有大量的必需氨基酸，如賴氨酸(含量占總蛋白的7.8％)、甲硫氨酸(含量占總蛋白的1.8％)和亮氨酸(含量占總蛋白的9.0％)。以對(duì)蝦肌肉蛋白為參考蛋白時(shí)，必需氨基酸指數(shù)(EAAI)為1.04，屬于優(yōu)質(zhì)蛋白源。異常畢赤酵母HN1-2菌株分泌的嗜殺因子可以殺死長(zhǎng)孢路德酵母、白色假絲酵母、二尖梅奇酵母、

4、季也蒙畢赤酵母、酒精酵母、解脂耶羅威亞酵母以及海尼克魯維酵母等自然界中廣泛存在的多種酵母，但對(duì)絲狀真菌和細(xì)菌沒有嗜殺活性。通過與敏感野生菌株共培養(yǎng)的研究，發(fā)現(xiàn)異常畢赤酵母HN1-2菌株在生長(zhǎng)過程中可以防止野生菌株的污染，這在發(fā)酵工業(yè)中意義重大。
　　 生產(chǎn)單細(xì)胞蛋白的一種重要方法是固體發(fā)酵(SSF)。通過單因子優(yōu)化的方法，對(duì)以麥麩-稻殼混合物為基質(zhì)的固體發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。最終確定最佳條件為：基質(zhì)含水量45％(w/w)，葡萄糖濃度