畢赤酵母Pichia anomala SRF對蘋果采后青霉病的生防機制研究.pdf

1、由Penicillium expansum引起蘋果、梨等水果的青霉病,是水果采摘后的重要病害之一,嚴(yán)重影響了果實的食用價值和市場價值。生物拮抗菌能有效防治果實采摘后腐爛,降低化學(xué)殺菌劑的用量,從而增加食品的安全性,降低了潛在的環(huán)境危害,然而人們對酵母拮抗菌的作用機理還沒有具體的相關(guān)報道,拮抗菌的抑菌機理的研究是增強拮抗菌的生防效果以及進行菌株篩選的重要前提。近年來,盡管不少研究者在生防模式方面做了不少工作,但由于目前研究方法和手段的有限

2、性,拮抗酵母菌的生防模式目前還不是非常清楚。目前的研究結(jié)果表明拮抗酵母菌的主要抑菌模式包括營養(yǎng)競爭、空間位點競爭、寄生、分泌幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶。本文主要從異常畢赤酵母SRF對蘋果采摘后青霉病的防治效果,單倍體的獲得以及酵母拮抗菌P.anomala SRF外切葡聚糖酶基因的克隆與表達,外切葡聚糖酶基因敲除載體的構(gòu)建等四個部分進行了研究,主要結(jié)果如下:
　　1.異常畢赤酵母 SRF能夠有效地抑制蘋果青霉病的發(fā)生,拮抗菌的抑菌效果與使用

3、濃度呈正相關(guān),酵母拮抗菌的使用濃度越高,蘋果青霉病的發(fā)病率越低,病斑直徑也就越小。
　　2.根據(jù)已報道的P.anomala外切葡聚糖酶基因設(shè)計引物,克隆了SRF外切葡聚糖酶基因,命名為PaExg(GenBank:AJ222862.1)?；蚝桶被嵝蛄蟹治霰砻?PaExg開放閱讀框(ORF)長1284 bp,編碼427個氨基酸,分子量為49.469 kD,等電點為4.72。序列比對和同源性分析表明,該序列與GenBank登錄的P.

4、anomala strain K的同源性高達100％,PaExg的保守結(jié)構(gòu)域分析表明,PaExg屬于GH15家族。構(gòu)建了SRF外切葡聚糖酶基因原核表達載體,并在IPTG誘導(dǎo)下在大腸桿菌中獲得了成功表達,表達的轉(zhuǎn)化子表現(xiàn)出明顯的葡聚糖酶活性,驗證了該菌株葡聚糖酶基因的克隆。
　　3.通過對預(yù)培養(yǎng)時間、溫度、鹽離子及其梯度濃度培養(yǎng)條件進行了研究。確定了異常畢赤酵母SRF野生型二倍體細胞的最佳產(chǎn)孢條件,在YPD培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)24 h,連