低溫培養(yǎng)增加畢赤酵母的外源蛋白產(chǎn)量的機制研究.pdf

1、畢赤酵母作為外源蛋白的表達系統(tǒng)，具有遺傳操作簡單，培養(yǎng)基成分明確且價格低廉，高效分泌表達能力，翻譯后的修飾等突出優(yōu)點，越來越多的被應用于外源蛋白的表達。低溫培養(yǎng)增加外源蛋白產(chǎn)量的報道很多，但其背后的機制并不是很清楚。近年來，錯誤折疊蛋白與細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力和細胞自噬等方面的研究提示，外源蛋白的錯誤折疊可能是影響蛋白分泌產(chǎn)量的一個主要因素。
　　在本研究中，我們利用重組表達人白細胞介素-10（rhIL-10）的畢赤酵母菌株作為研究模型。

2、結(jié)果顯示，在20℃的甲醇誘導條件下得到了較高的rhIL-10的蛋白產(chǎn)量，而在30℃的甲醇誘導條件下rhIL-10的蛋白產(chǎn)量低且酵母細胞死亡率高。進一步的研究結(jié)果顯示，在30℃的甲醇誘導條件下，酵母細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中長時間的積累了較高水平的G3-pro-rhIL10（未成熟的rhIL-10，具有糖基化修飾的信號肽）。并且，伴隨著G3-pro-rhIL10在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的滯留，酵母細胞中積累了較高水平的活性氧自由基，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的Ca2+泄漏到細胞質(zhì)中