重組人源明膠在畢赤酵母中的表達(dá)條件的探索.pdf

1、明膠是失去活性的膠原，具有許多優(yōu)良的理化性質(zhì)，被廣泛應(yīng)用于食品、美容、醫(yī)療及感光材料等多種行業(yè)。目前，明膠的主要來(lái)源于動(dòng)物。這樣的明膠存在病毒和阮病毒的潛在危險(xiǎn)。重組有很好的提供穩(wěn)定的、可預(yù)測(cè)性，同時(shí)能知道準(zhǔn)確的分子量。但是目前重組的明膠一般未能發(fā)生羥化或羥化的程度很低。
　　 本研究中所用到的畢赤酵母重組了明膠片段基因和明膠脯氨酰羥化酶基因，并實(shí)現(xiàn)了共表達(dá)。在誘導(dǎo)液的上清中，通過(guò)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，我們檢測(cè)到脯氨酰羥化酶

2、的β亞基（二硫鍵異構(gòu)酶）和重組明膠，并對(duì)明膠進(jìn)行了N端測(cè)序，結(jié)果與明膠的理論N端氨基酸序列完全吻合。
　　 我們通過(guò)對(duì)誘導(dǎo)條件的優(yōu)化，電泳觀(guān)察誘導(dǎo)液上清中二硫鍵異構(gòu)酶的含量，來(lái)確定使產(chǎn)物最大化的誘導(dǎo)條件。得出的結(jié)論是在250mL搖瓶中，在裝液量不超過(guò)50mL的情況下，溫度為25℃，搖床轉(zhuǎn)速為250rpm時(shí)，每天添加2次甲醇，添加量為2％為最佳誘導(dǎo)條件，濕菌密度＜0.5g/mL的情況下，菌密度越大，產(chǎn)物積累的越多。二硫鍵異構(gòu)酶在第