畢赤酵母表達(dá)重組人白細(xì)胞介素11的純化與鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、重組人白細(xì)胞介素11在臨床用于治療化療導(dǎo)致的血小板低下癥,目前浣的表達(dá)方法都是通過大腸桿菌融合表達(dá),工藝復(fù)雜.鑒于畢赤酵母(Pichiapastorish)具有易操作、低成本等許多優(yōu)點(diǎn),人工合成了經(jīng)計(jì)算機(jī)優(yōu)化的IL-11的基因,構(gòu)建了表達(dá)rhIL-11的Pichiapastoris重組菌.利用這重組菌,研究了其下游工藝.在15升的發(fā)酵缺缺罐經(jīng)兩步法發(fā)酵,首先經(jīng)甘油培養(yǎng),待甘油耗盡后利用甲醇誘導(dǎo)rhIL-11的表達(dá),最終表達(dá)量大于0.4g

2、/L.離心收集上清液,經(jīng)截留孔徑為5KD的超濾膜堆以切向流方式脫鹽并濃縮,去除絕大部分小分子雜質(zhì),稀釋液為20mmol/LpH8.0Tris-HCl,處理后發(fā)酵液電導(dǎo)小于5mS/cm.初步純化選擇了陽離子交換填料.比較了CM-SepharoseFast和FlowSP-SepharoseFastFlow兩種層析介質(zhì),前者收率較后者高20﹪.而且純化效果相近.研究了離子交換柱的洗脫條件.純化終產(chǎn)品與E.coli融合表達(dá)的產(chǎn)品(NEUMEGA

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