2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、膠原蛋白(collagens)是一類細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,在維護(hù)各種組織的結(jié)構(gòu)完整性方面,扮演著重要的角色。膠原蛋白具有獨(dú)特結(jié)構(gòu),并因此而具而有低抗原性和優(yōu)良的生物相容性,使其成為一種重要的生物醫(yī)學(xué)材料,而且這種重要性與日俱增,但膠原主要是從動(dòng)物的組織中提取的,這樣會(huì)帶來(lái)很多麻煩,如免疫排斥和病原菌的污染,因此,利用高效的、規(guī)?;闹亟M體系統(tǒng)來(lái)生產(chǎn)重組人膠原將得到廣泛的應(yīng)用。
  本研究以流產(chǎn)胎兒的胎皮等為試材,用Trizol提取其總R

2、NA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA第一條鏈,設(shè)計(jì)特異引物,引入EcoRI和NotI雙酶切位點(diǎn),優(yōu)化PCR條件,擴(kuò)增出317bp的目的條帶,經(jīng)測(cè)序并與GenBank上公布的人Ⅲ型膠原蛋白α1鏈基因序列比對(duì),其相似性達(dá)99.66%。同時(shí),根據(jù)畢赤酵母的密碼子使用情況,人工設(shè)計(jì)并合成了317bp的優(yōu)化基因,將其和天然的人Ⅲ型膠原蛋白α1鏈三肽區(qū)基因分別與表達(dá)載體pET28a-連接,獲得重組原核表達(dá)載體pET-28a-ColⅢ(N)和pET-28a-Co

3、lⅢ(A),將兩個(gè)重組原核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入BL21(DE3)菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE電泳顯示,在13kD處出現(xiàn)蛋白特異條帶,與預(yù)期蛋白大小相符,初步表明目的基因在原核細(xì)胞獲得表達(dá)。
  將人Ⅲ型膠原蛋白的α1鏈三肽區(qū)基因和密碼子優(yōu)化的類人膠原基因插入到畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9K上,構(gòu)建出酵母表達(dá)載體pPIC9K-ColⅢ(N)和pPIC9K-ColⅢ(A)。經(jīng)測(cè)序無(wú)誤后將重組質(zhì)粒用SacⅠ線性化,分別電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌GS

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