重組畢赤酵母產(chǎn)α-葡聚糖酶發(fā)酵工藝的研究.pdf

1、α-葡聚糖酶是一種重要的工業(yè)用酶，主要用在制糖工藝中，針對(duì)性地分解其中出現(xiàn)的α-葡聚糖，以?xún)?yōu)化糖廠制糖工藝，降低制糖成本，提高糖產(chǎn)品質(zhì)量。目前國(guó)內(nèi)對(duì)α-葡聚糖酶的研究還處于初級(jí)階段，天然菌株產(chǎn)酶量及酶性能都滿(mǎn)足不了實(shí)際應(yīng)用。隨著基因工程方法的廣泛應(yīng)用，為實(shí)現(xiàn)α-葡聚糖酶的基因工程菌表達(dá)提供了可能。本研究的內(nèi)容即是采用一株重組畢赤酵母生產(chǎn)α-葡聚糖酶，對(duì)發(fā)酵過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行分析，主要研究?jī)?nèi)容及相應(yīng)結(jié)果如下：
　　

2、試驗(yàn)在搖瓶水平對(duì)重組畢赤酵母表達(dá)α-葡聚糖酶的誘導(dǎo)條件進(jìn)行了研究，得到的結(jié)果為：培養(yǎng)基以有機(jī)培養(yǎng)基BMMY為宜；離心與否對(duì)α-葡聚糖酶的表達(dá)影響不大；添加0．01％的油酸和0．2％Tween-80、pH值6．0、裝液量為25mL,/250mL、搖床轉(zhuǎn)速為200r/min、種齡為24h、接種量為10％、溫度為30℃、甲醇誘導(dǎo)濃度為1．5％、每12h補(bǔ)加一次甲醇、誘導(dǎo)144h，α-葡聚糖酶表達(dá)量最高，為73U/mL。且提高甲醇濃度穩(wěn)定性更有

3、利于表達(dá)α-葡聚糖酶，在發(fā)酵罐培養(yǎng)流加成分中可以此作為參考。
　　 利用5L發(fā)酵罐進(jìn)行重組畢赤酵母發(fā)酵優(yōu)化，主要考察誘導(dǎo)菌體濃度、溶氧、甲醇?xì)埩簟⒗业鞍姿馕锏戎饕蛩亍０l(fā)酵罐優(yōu)化得到的最優(yōu)發(fā)酵條件為：菌體濕重250g/L(誘導(dǎo)菌體密度)才開(kāi)始誘導(dǎo)，誘導(dǎo)表達(dá)階段溶氧控制在10-20％，最優(yōu)誘導(dǎo)時(shí)間為90h，另外添加1％的酪蛋白水解物(外營(yíng)養(yǎng)物)，有利于α-葡聚糖酶的表達(dá)和穩(wěn)定，在此最佳條件下發(fā)酵得出的結(jié)果為330U/mL。